中藥重樓聯(lián)合奧沙利鉑抗血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、血管生成(Angiogenesis)是指從已經(jīng)存在的血管之上以萌芽的方式形成新的毛細(xì)血管。Folkman先生在1971年首次提出腫瘤的生長(zhǎng)依賴于新生血管的生成的假說,這一假說基于作者觀察到在缺乏血管的部位很少出現(xiàn)惡性腫瘤。新生的血管可以為腫瘤的生長(zhǎng)提供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并且導(dǎo)致腫瘤的快速轉(zhuǎn)移,而通過抑制腫瘤組織中新生血管的形成能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。某些化療藥物,在小劑量、高頻率的給藥方式下可以選擇性地抑制腫瘤組織內(nèi)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)

2、,使腫瘤細(xì)胞因血供不足而生長(zhǎng)受阻,這種特殊的給藥模式,化療藥物的作用靶位已不是腫瘤細(xì)胞,而是新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞,這就是小劑量化療或抗血管生成化療。目前,抗血管生成藥物價(jià)格昂貴,中國(guó)的經(jīng)濟(jì)條件難以負(fù)擔(dān),而中藥是我國(guó)的寶庫(kù),尋找具有抗血管生成作用的物美價(jià)廉的中藥,顯得尤其重要。中醫(yī)藥治療惡性腫瘤有著豐富的經(jīng)驗(yàn),近年來,隨著抗血管生成治療的研究的深入,發(fā)現(xiàn)很多傳統(tǒng)中藥及其化學(xué)成分也具有較好的抑制腫瘤新生血管的作用,并且價(jià)格低廉,毒副作用較小,

3、逐漸成為國(guó)內(nèi)抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí),中藥重樓(Rhizoma Paridis)及其化學(xué)成分具有顯著的抗腫瘤作用,需要深入研究重樓及其與化療藥物聯(lián)合在腫瘤的抗血管生成中的作用。 [目的]:探討中藥重樓醇提物、奧沙利鉑以及兩者聯(lián)合在體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中可能具有的抗血管生成的作用。 [方法]:采用MTT法檢測(cè)中藥重樓醇提物、奧沙利鉑以及兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC和人腸癌細(xì)胞LOVO增殖的抑制作用;采用

4、Transwell模型,觀察藥物對(duì)HUVEC的遷移的作用;采用三維新生血管模型,觀察藥物對(duì)小管形成的形態(tài)的影響;采用AnnexinⅤ熒光染色、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒和流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)藥物作用對(duì)細(xì)胞的凋亡和周期的影響;觀察藥物對(duì)于雞胚絨毛尿囊膜模型中新生血管的影響。 [結(jié)果]:中藥重樓醇提物在7.5μg/ml~240μg/ml之間對(duì)HUVEC細(xì)胞的抑制作用呈劑量依賴性(IC50=36.83μg/ml),對(duì)LOVO的細(xì)胞毒作用也

5、呈劑量依賴性(IC50=267.54μg/ml),重樓醇提物對(duì)HUVEC細(xì)胞的IC50值明顯低于其對(duì)LOVO細(xì)胞的IC50值,重樓醇提物對(duì)HUVEC細(xì)胞和LOVO細(xì)胞的作用顯示出明顯的差異細(xì)胞毒性;奧沙利鉑在0.5μg/ml~16μg/ml之間對(duì)HUVEC細(xì)胞的抑制作用呈劑量依賴性(IC50=3.52μg/ml),對(duì)LOVO的細(xì)胞毒作用也呈劑量依賴性(IC50=8.20μg/ml),奧沙利鉑對(duì)HUVEC細(xì)胞的IC50值明顯低于其對(duì)LOV

6、O細(xì)胞的IC50值,奧沙利鉑對(duì)HUVEC細(xì)胞和LOVO細(xì)胞的作用顯示出明顯的差異細(xì)胞毒性;兩者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同或者次加的作用;中藥重樓醇提物在7.5μg/ml~60μg/ml時(shí)對(duì)HUVEC的遷移有一定的抑制作用,能夠明顯減少HUVEC遷移的數(shù)目,7.5μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml的重樓醇提物的抑制率分別為14.80%、25.73%、35.57%、70.12%,奧沙利鉑在0.5~4μg/ml時(shí)對(duì)HUVEC的遷

7、移也有一定的抑制作用,能夠明顯減少HUVEC遷移的數(shù)目,0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml的奧沙利鉑的抑制率分別為17.45%、31.23%、45.45%、59.04%,兩者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同或者次加作用;中藥重樓醇提物和奧沙利鉑能夠破壞臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形成的管腔狀結(jié)構(gòu),兩者聯(lián)合應(yīng)用可能具有協(xié)同增效作用;HUVEC經(jīng)中藥重樓醇提物、奧沙利鉑作用48h后,能夠明顯誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡,兩藥聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用

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