萘乙酸對(duì)睪丸細(xì)胞增殖與凋亡的影響研究.pdf

1、目的：本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)和喂飼小鼠染毒飼料的方法，觀察了萘乙酸(α-naphthlcetic acid，NAA)對(duì)小鼠體重、血清GSH-Px水平、MDA含量、睪丸細(xì)胞增殖、PCNA、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)的影響，初步探討了NAA對(duì)小鼠睪丸細(xì)胞增殖與凋亡的影響。
　　 方法：
　　 1、體外睪丸細(xì)胞增殖活性水平：取正常小鼠睪丸組織制成細(xì)胞懸液，分別加入不同濃度的NAA與睪丸細(xì)胞共同培養(yǎng)，測(cè)定(1)25μmo

2、l/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L NAA對(duì)睪丸細(xì)胞增殖活性的影響；(2)50μmol/L和100μmol/L NAA在3、6、12、24、48h對(duì)睪丸細(xì)胞增殖活性的影響。用MTT法測(cè)定睪丸細(xì)胞增殖活性水平。
　　 2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：將25只健康雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只。正常對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠喂飼普通顆粒飼料，高、中、低劑量組分別將5000、1000、200mg/kg

3、的萘乙酸加入飼料中喂飼小鼠，陽(yáng)性對(duì)照組于處死前3天每天腹腔注射環(huán)磷酰胺20mg/kg體重。小鼠喂養(yǎng)4周。(1)增殖水平：用MTT法測(cè)定各組睪丸細(xì)胞增殖活性水平，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)(2)凋亡水平：用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Bcl-2和半光天冬酶（Caspase-3）表達(dá)。(3)脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)：摘眼球取血，分離血清，購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)的測(cè)試盒測(cè)定血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平和丙二醛(MDA)含量。(4

4、)體重：在飼養(yǎng)過(guò)程中，每三天測(cè)定小鼠體重一次，并繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。(5)睪丸/體重指數(shù)：小鼠處死工后取下睪丸組織稱(chēng)其重量，并計(jì)算睪丸/體重指數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 1、體外睪丸細(xì)胞增殖活性水平：細(xì)胞增殖活性測(cè)定結(jié)果顯示，睪丸細(xì)胞體外培養(yǎng)24h，50μmol/L劑量組和正常對(duì)照組睪丸細(xì)胞增殖活性分別為0.761+-0.006和0.891+-0.004，差異有顯著性(P<0.01)。在同一作用時(shí)間點(diǎn)，隨著NAA劑量的增加，50

5、、100、200、400μmol/L NAA組的睪丸細(xì)胞增殖活性依次降低。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)50、100μmol/L NAA組的睪丸細(xì)胞增殖活性逐漸降低。結(jié)果表明NAA對(duì)睪丸細(xì)胞的增殖活性有抑制作用。
　　 2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：
　　 (1)增殖水平：MTT結(jié)果顯示，高劑量組和正常對(duì)照組的睪丸細(xì)胞增殖活性分別為0.501+-0.069和0.875+-0.082，差別有顯著性意義(P<0.05)。高劑量NAA組PCNA陽(yáng)性表達(dá)率

6、為8.9％，正常對(duì)照組為34.9％，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有顯著性(P<0.05）。
　　 （2）凋亡水平：高、中劑量NAA組Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為11.4％和24.9％，正常對(duì)照組為33.3％，經(jīng)檢驗(yàn)，差異均有顯著性(P<0.05)。高劑量組和正常對(duì)照組Caspase-3職性表達(dá)率分別為41.3％和9.1％，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (3)血清GSH-Px水平和MDA含量：高、中劑量組GSH-Px活力分別為759.01+-1

7、1.32NU/ml、908.87+-lO.96NU/ml，均低于正常對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05)。MDA含量高劑量組和正常對(duì)照組分別為10.41+-0.12nmol/ml、8.41+-0.12nmol/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (4)體重：給予萘乙酸28天以后，各劑量組小鼠體重與對(duì)照組相比均有所降低，高、中劑量組小鼠體重分別為14.96+-0.83和31.48+-1.19，與對(duì)照組相比差異有顯著性(

8、P<0.01)。
　　 (5)睪丸/體重指數(shù)：高劑量組與正常對(duì)照組睪丸/體重指數(shù)分別為(1.383+-0.029)％和(0.859+-0.025)％，差別有顯著性意義(P<0.05)。中劑量組也較正常對(duì)照組升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、NAA對(duì)睪丸細(xì)胞的增殖活性有抑制作用，可降低睪丸細(xì)胞PCNA蛋白的表達(dá)水平。
　　 2、NAA能降低睪丸細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)，提高Caspase-3的表達(dá)