DEHP對(duì)宮內(nèi)仔鼠睪丸Leydig細(xì)胞分化和增殖能力的影響.pdf

1、目的： 觀察不同劑量的DEHP對(duì)宮內(nèi)雄性仔鼠Leydig細(xì)胞形態(tài)和功能的影響，探討不同劑量的DEHP對(duì)Leydig細(xì)胞分化和增殖能力的影響及作用機(jī)制。 方法： 體重220-280g之間自然受孕的雌性SD大鼠24只分成四組：正常對(duì)照組(n=6)、低劑量組(n=6)、中劑量組(n=6)、高劑量組(n=6)。后三組每天通過灌胃給予不同劑量的DEHP和玉米油混合物0.5ml，每次DEHP灌胃實(shí)際量：低劑量組10mg/kg

2、.d，中劑量組100mg/kg.d，高劑量組750mg/kg.d。正常對(duì)照組每天同時(shí)灌予等體積的玉米油。灌胃時(shí)間從母鼠受孕第一天開始(孕鼠見陰栓為受孕第0天)直到仔鼠出生后第一天止(約為受孕第21天)。斷頭處死出生后第一天的雄性仔鼠，取血清和睪丸。觀察以下指標(biāo)：(1)測(cè)量雄性仔鼠的體重和肛門生殖器距離(AGD)。(2)酶免疫發(fā)光法檢測(cè)血清睪酮(T)水平；(3)取新鮮睪丸組織，常規(guī)固定，光鏡和電鏡觀察睪丸Leydig細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；(4

3、)用熒光定量Realtime-PCR方法觀察睪丸組織內(nèi)細(xì)胞基因IGF-1、StAR、AR、LIF、LHR、INSL3 mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、體重和肛門生殖器距離(AGD)：與正常組比較，低劑量組雄仔體重減輕(P<0.05)，中、高劑量組體重明顯減輕(P<0.01)。高劑量組AGD縮短(P<0.05)，中劑最組呈下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。低劑量組無明顯改變(P>0.05)。與低劑量組比較，中劑量

4、組體重和AGD呈下降趨勢(shì)(P>0.05)，高劑量組體重和AGD下降(P<0.05)。與中劑量組比較，高劑量組體重和AGD下降(P<0.05)。 2、血清睪酮(T)水平：與正常組比較，低劑量組血清T水平升高(P<0.05)，中劑量組血清T水平降低(P<0.05)，高劑量組明顯降低(P<0.01)。與中劑量組比較，高劑量組T水平呈下降趨勢(shì)(P>0.05)。 3、光鏡觀察顯示：正常組Leydig細(xì)胞呈小簇狀均勻分布在曲細(xì)精管之

5、間。低劑量組Leydig細(xì)胞有成簇聚集的趨勢(shì)，簇內(nèi)細(xì)胞數(shù)目20-30個(gè)左右。高中劑量組出現(xiàn)明顯的成簇聚集現(xiàn)象，高劑量組Leydig細(xì)胞呈瘤樣聚集，簇內(nèi)細(xì)胞數(shù)目達(dá)100個(gè)以上。 4、電鏡觀察顯示：正常組Leydig細(xì)胞胞漿內(nèi)含豐富的線粒體和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并見少量脂滴。低劑量組Leydig細(xì)胞胞漿內(nèi)線粒體，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量明顯增多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體輕度擴(kuò)張，并見少量脂滴。中高劑量組Leydig細(xì)胞體積縮小，胞漿內(nèi)線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)目減少，脂

6、滴明顯增多。 5、睪丸內(nèi)細(xì)胞IGF-1、StAR、AR、INSL3、LIF、LHR基因mRNA表達(dá)水平：與正常組比較，低劑量組IGF-1mRNA表達(dá)升高(P<0.05)，StARmRNA表達(dá)降低(P<0.05)。 LIF、INSL3mRNA表達(dá)呈升高趨勢(shì)但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，AR、LHRmRNA表達(dá)變化無明顯差異(P>0.05)。中劑量組IGF-1、StAR、INSL3、LHRmRNA表達(dá)降低(P<0.05)，LIFm

7、RNA表達(dá)升高(P<0.05)，ARmRNA變化不明顯(P>0.05)。高劑量組IGF-1、StAR、INSL3、LHRmRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01)，LIF mRNA表達(dá)顯著升高(P<0.01)，ARmRNA表達(dá)變化不明顯(P>0.05)。與低劑量組比較，中、高劑量組StARmRNA表達(dá)降低(P<0.05)，高劑量組LIFmRNA表達(dá)升高(P<0.05)，其他無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與中劑量組比較，高劑量組StARmRNA

8、表達(dá)降低(P<0.05)，LIFmRNA表達(dá)升高(P<0.05)，其他無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1. DEHP可影響宮內(nèi)雄性仔鼠的生長發(fā)育，能降低其體重，并存在量效關(guān)系。高劑量的DEHP能明顯縮短雄仔肛門生殖器距離。 2、DEHP可影響IGF-1、StAR、 INSL3、LIF、LHR的基因表達(dá)水平，這可能是DEHP影響胎兒型Leydig細(xì)胞分化增殖及其功能的重要機(jī)制。 3、不同劑最的DEH