羅格列酮對大鼠血管平滑肌細胞凋亡和轉化生長因子-β1分泌的影響.pdf

1、目的：觀察羅格列酮對大鼠血管平滑肌細胞（AVSMC）凋亡及轉化生長因子-β1（TGF-β1）分泌的影響。 方法：酶消化法原代提取SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞進行體外培養(yǎng)，取5-8代細胞進行實驗。無血清培養(yǎng)培養(yǎng)24小時后分別采用0、25、50、100、200、400umol/L羅格列酮處理，流式細胞學檢測凋亡率，發(fā)現(xiàn)100umol/L為凋亡誘導的最佳濃度。最佳濃度羅格列酮處理，分別于0、0.5、1、3、6、18、24小時各取培養(yǎng)基5

2、0ul，酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測培養(yǎng)基中TGF- β1的水平，發(fā)現(xiàn)0.5小時TGF- β1的水平最高。同樣方法培養(yǎng)24小時，分四組，對照組、100umol/L羅格列酮組、100umol/L羅格列酮+ GW9662（PPAR-γ阻斷劑）組、100umol/L羅格列酮+ anti- TGF-β1（抗TGF-β1抗體）組，0.5小時取培養(yǎng)基50ulELISA法檢測TGF- β1水平,24小時后流式細胞學和原位細胞凋亡檢測試劑盒法（

3、TUNEL）檢測細胞凋亡。 結果：觀察發(fā)現(xiàn)羅格列酮組細胞凋亡率較對照組增加（P〈0.05）,并且隨著羅格列酮濃度的增加VSMC凋亡率越來越高（P〈0.05），100umol/L時其凋亡達到最高（P〈0.05），而濃度超過100umol/L凋亡率并不增加甚至降低，提示羅格列酮誘導VSMC凋亡在一定范圍內(nèi)存在濃度依賴;并且羅格列酮100umol/L+ GW9662組和羅格列酮100umol/L+ anti- TGF-β1組細胞凋亡率

4、較羅格列酮100umol/L組降低（P〈0.05），提示GW9662和anti- TGF-β1均可逆轉羅格列酮誘導的VSMC凋亡。羅格列酮100umol/L處理后0.5小時內(nèi)TGF-β1水平明顯高于對照組（P〈0.05），且0.5小時達到最高（P〈0.05）,TGF-β1水平達到最高后又快速下降（P〈0.05），提示羅格列酮可誘導VSMC快速分泌TGF-β1；并且羅格列酮100umol/L+ GW9662組TGF-β1水平較羅格列酮10