糖基化終產(chǎn)物對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的影響及羅格列酮的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)鈣化的影響以及羅格列酮(Rosiglitazone,RSG)對(duì)上述影響的干預(yù)作用。 方法： 1、體外培養(yǎng)VSMCs,在含10 mmol·L-1 β-甘油磷酸鹽(β-GP)培養(yǎng)液中加入不同濃度(50、100、200、400 mg·L-1

2、)的AGE-BSA共同孵育VSMCs不同時(shí)間。采用細(xì)胞層鈣沉積含量、Von kossa染色和細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性測(cè)定判斷細(xì)胞鈣化程度,RT-PCR、Western-blot檢測(cè)骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)mRNA及蛋白表達(dá)。 2、觀察不同濃度RSG(1.0、10、100 μmol·L-1)對(duì)上述影響的干預(yù)作用。 結(jié)果： 1、AGE-BSA呈

3、時(shí)間和濃度依賴性增加VSMCs層鈣沉積含量和ALP活性,200 mg·L-1 AGE-BSA與VSMCs共孵育10天,與對(duì)照組相比,細(xì)胞層鈣沉積含量(3.57±0.24 vs 0.62±0.11,p<0.01)及ALP活性(246.10±43.75 vs 42.73±8.10,p<0.01)明顯增加,Von kossa染色顯示細(xì)胞間大量棕褐色磷酸鹽沉積；AGE-BSA可促進(jìn)VSMCs OPG mRNA和蛋白表達(dá),200 mg·L-1 A

4、GE-BSA與VSMCs共孵育24 h,與對(duì)照組相比,OPG mRNA(0.843±0.050 vs 0.482±0.062,p<0.01)及蛋白(0.810±0.084 vs 0.258±0.049,p<0.01)明顯增加。 2、RSG(10 μmol·L-1)與AGE-BSA(200 mg·L-1)共同干預(yù)VSMCs 6天后,與對(duì)照組相比,細(xì)胞層鈣沉積含量(1.74±0.20 vs 2.36±0.35,p<0.05)及ALP

5、活性(156.93±10.73 vs 211.83±31.40,p<0.05)明顯降低；RSG與AGE-BSA共同干預(yù)VSMCs 24 h后,與對(duì)照組相比,OPG mRNA(0.646±0.048 vs 0.821±0.044,p<0.05)和蛋白(0.601±0.015 vs 0.786±0.080,p<0.05)的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低。 結(jié)論： 1、AGE-BSA可明顯增加VSMCs層鈣沉積含量和ALP活性,上調(diào)