FKN-CX3CR1對小細胞肺癌系H446遷移和侵襲能力的影響及其機制初探.pdf

1、目的：FKN/CX3CR1可以介導(dǎo)T細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞的游走和活化以及腫瘤細胞的粘附和侵襲,在炎癥、疼痛、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等病理生理過程中發(fā)揮重要作用,而FKN對小細胞肺癌生物學(xué)行為的影響尚未見報道。本課題旨在初步探討:FKN/CX3CR1對小細胞肺癌系H446遷移和侵襲能力的影響及其可能機制;細胞因子TNF-a和TGF-P對H446細胞中CX3CR1表達的影響。
　　方法：用PCR、Western-blot法、免疫熒光法

2、檢測H446細胞中CX3CR1的表達情況;用Transwell小室法檢測人源重組FKN對H446細胞遷移和侵襲功能的影響;用Western-blot法檢測不同濃度FKN(0ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、120ng/ml)作用H446細胞24h后對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2和MMP9影響;用Western-blot法檢測FKN(80ng/ml)作用不同時間(0min、5min、15min、30min、60min)

3、后H446細胞中ERK、AKT、NF-kB、STAT3磷酸化水平的變化。用RT-PCR、Western-blot、免疫熒光等技術(shù)檢測不同濃度TNF-a、TGF-P(0ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml)對H446細胞中CX3CR1在mRNA和蛋白水平表達的影響。
　　結(jié)果：CX3CR1的mRNA和蛋白受體在人小細胞肺癌系H446中均有表達。下室中添加FKN可以對H446

4、起到趨化作用,而用CX3CR1的中和性抗體預(yù)處理H446細胞后,FKN對H446的趨化作用明顯減弱。同時,外源性的FKN可以直接作用于H446細胞,增加其遷移和侵襲能力。當用不同濃度的FKN作用H446細胞24h后,MMP9的表達隨FKN濃度的增加而增加,而MMP2的表達則未見明顯改變。用FKN作用H446不同時間后檢測發(fā)現(xiàn),ERK1/2(Thr202/Tyr204)、AKT(Ser473)、NF-KB(p65)的磷酸化水平均未見明顯改

5、變,而STAT3(Tyr705)的磷酸化水平隨FKN作用時間延長有所上調(diào)。
　　不同濃度TGF-P(0.01-100ng/ml)對H446細胞中CX3CR1mRNA表達有明顯的調(diào)節(jié)作用,當外源性TGF-P為1ng/ml時,可以明顯上調(diào)CX3CR1的表達,而濃度為100ng/ml時則抑制CX3CR1的表達。蛋白水平的檢測則顯示不同濃度TGF-P都可以上調(diào)CX3CR1的表達,在1ng/ml時這種上調(diào)作用最為明顯。不同濃度的TNF-a對

6、H446中CX3CR1的mRNA和蛋白表達則未見明顯影響。
　　結(jié)論：
　　1、FKN可以通過與H446細胞表面的CX3CR1結(jié)合從而介導(dǎo)對H446細胞的趨化作用。
　　2、外源性的FKN作用于H446細胞,通過上調(diào)STAT3的磷酸化水平,提高細胞MMP9的表達,從而提升其遷移和侵襲能力。
　　3、TGF-P可以上調(diào)H446細胞中CX3CR1蛋白水平的表達,在1ng/ml時上調(diào)最為明顯;而TNF-a對H446中C