染料木黃酮在小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞中通過(guò)抑制FoxM1通路發(fā)揮抗腫瘤作用.pdf

1、第一部分:染料木黃酮對(duì)小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞生長(zhǎng)與遷移能力的影響
　　 目的:小細(xì)胞肺癌約占新診斷肺癌總數(shù)的15％-20％，其惡性程度高，增值快，生長(zhǎng)迅速，轉(zhuǎn)移早，5年生存率低，迫切需要新的治療手段和靶點(diǎn)。染料木黃酮(genistein)是最重要的大豆異黃酮之一，對(duì)多種腫瘤有預(yù)防及治療作用，然而它在小細(xì)胞肺癌中的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在研究genistein在小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移能力的影響，以明確genist

2、ein在小細(xì)胞肺癌中的抗腫瘤作用。
　　 方法:利用不同濃度的genistein處理H446細(xì)胞，采用CCK-8法檢測(cè)genistein對(duì)H446細(xì)胞增殖能力的影響，流式細(xì)胞術(shù)分析genistein對(duì)H446細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響，應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的改變。
　　 結(jié)果:H446細(xì)胞經(jīng)不同濃度（0、10、25、50、75、100μmol/L）的genistein分別作用24、48、72h后，CCK-8法檢測(cè)細(xì)

3、胞增殖能力，結(jié)果顯示細(xì)胞增殖受到明顯抑制，且隨著genistein濃度的升高及培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖抑制愈明顯;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)不同濃度genistein處理后，H446細(xì)胞凋亡率的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)genistein作用72h后，細(xì)胞凋亡率隨genistein濃度升高逐漸上升，DMSO對(duì)照組、25μmol/L、50μmol/L及75μmol/L組的凋亡率分別為4.8％±0.8％、12.5％±2．0％、44.5％±3.7％和54.9％±

4、2.9％(P＜0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化，發(fā)現(xiàn)H446的G2/M期細(xì)胞比例由對(duì)照組的21.9％±3.3％增加至40.4％±1.6％(25μM)、61.9％±2.7％(50μM)、72.9％±4.3％（75μM），而G1及S期細(xì)胞數(shù)逐漸降低，細(xì)胞阻滯于G2/M期(P＜0.05)，即genistein可誘導(dǎo)H446細(xì)胞發(fā)生G2/M期細(xì)胞周期阻滯，細(xì)胞增殖受抑;劃痕實(shí)驗(yàn)顯示經(jīng)genistein處理48h后，H446細(xì)胞劃痕修復(fù)速率

5、明顯下降，說(shuō)明genistein可明顯抑制H446細(xì)胞的遷移能力。
　　 結(jié)論:Genistein引起H446細(xì)胞發(fā)生與藥物濃度相關(guān)的增殖抑制、凋亡增加、G2/M期細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞遷移能力下降，有可能成為新的有效的抗小細(xì)胞肺癌藥物。
　　 第二部分Genistein在小細(xì)胞肺癌H446細(xì)胞中發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機(jī)制
　　 目的:探討genistein在小細(xì)胞肺癌H446中發(fā)揮抗腫瘤作用的分子機(jī)制。
　　

6、 方法:Westernblot及Real-timePCR檢測(cè)經(jīng)genistein處理后H446細(xì)胞中FoxM1基因及其下游靶基因表達(dá)的變化;FoxM1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染H446細(xì)胞，采用CCK-8法檢測(cè)FoxM1過(guò)表達(dá)前后，genistein抑制細(xì)胞增殖能力的變化。
　　 結(jié)果:經(jīng)genistein作用72h后，Real-timePCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H446細(xì)胞中FoxM1靶基因cyclinB1、cdc25B、survivin、p21表達(dá)情

7、況，結(jié)果顯示隨genistein濃度升高，cyclinB、cdc25B、survivin表達(dá)逐漸下降，p21表達(dá)逐漸增加;Westernblot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)FoxM1及其靶蛋白cyclinB1出現(xiàn)與genistein濃度相關(guān)的表達(dá)下降、p21表達(dá)增加。上述結(jié)果顯示genistein可抑制FoxM1信號(hào)通路活性;該研究利用FoxM1cDNA轉(zhuǎn)染H446細(xì)胞以促進(jìn)FoxM1過(guò)表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FoxM1表達(dá)上調(diào)后，genistein對(duì)H446