肺癌A549和H446細(xì)胞系腫瘤始發(fā)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：該實(shí)驗(yàn)主要是通過克隆形成能力和致瘤能力兩方面來研究非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）A549細(xì)胞系和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）H446細(xì)胞系中腫瘤始發(fā)細(xì)胞的比例。 方法：采用有限稀釋法將A549和H446細(xì)胞稀釋至10個/ml，100ul/孔種96孔板，1周后顯微鏡下檢測細(xì)胞單克隆形成的數(shù)量及大小。將單克隆傳代，以觀察細(xì)胞自我更新能力；

2、隨機(jī)取6個大克隆傳代，細(xì)胞增殖至106時，測其生長曲線，檢測其增殖能力；收集來自于1個細(xì)胞形成的克隆細(xì)胞種于BALB/C裸鼠皮下，觀察其致瘤能力。以CD133為分子標(biāo)記，使用免疫磁珠細(xì)胞分選技術(shù)分選細(xì)胞，測定CD133+細(xì)胞和CD133-細(xì)胞的克隆形成能力。測定Hoechst33342染色是否會影響非SP細(xì)胞的增殖能力和單克隆形成能力。 結(jié)果：A549和H446細(xì)胞均能形成3種類型的克?。捍罂寺。ǘ嘤?00個細(xì)胞），中克隆（50

3、-100個細(xì)胞）和小克?。ㄉ儆?0個細(xì)胞）?？寺〖?xì)胞傳代后，來源于小克隆的細(xì)胞不能形成新的克隆，在第2代就凋亡；來源于中克隆的細(xì)胞在第2代主要形成小克隆，只形成數(shù)量很少的中克隆，在第4代均凋亡；而來源于大克隆的細(xì)胞總是形成3種類型的克隆，即使是第10代。 45％以上的細(xì)胞能夠形成大克隆，大克隆傳代后又能形成新的克?。粊碓从?個大克隆的細(xì)胞種植到BALB/C裸鼠身上，10天左右就能形成肉眼可見的腫瘤。 磁分選后CD133+

4、細(xì)胞和CD133-細(xì)胞克隆形成能力及致瘤能力相同；臺盼蘭染色顯示Hoechst33342染色能夠明顯影響細(xì)胞活性，種96孔板后細(xì)胞的克隆形成能力和增殖能力明顯降低（p<0．05）。 細(xì)胞周期顯示，A549細(xì)胞系中G1、G2和S期細(xì)胞分別占43．39％、13．65％和42．96％；H446細(xì)胞系中G1、G2和S期細(xì)胞分別占62．75％、13．29％和23．96％。A549中能形成大克隆的單個細(xì)胞擴(kuò)增至106需要的時間19～26天，