體外遺傳毒性評價試驗的優(yōu)化.pdf

1、遺傳毒性試驗可以考察受試物是否具有潛在致癌性或者致突變性，是藥物毒性評價和環(huán)境致癌物研究的重要組成部分。建立一個具有良好特異性和敏感性并且操作簡便的體外試驗體系，可以在藥物早期研發(fā)過程中提供重要的參考依據(jù)，降低研發(fā)風(fēng)險。此外，在體外實驗體系中采用合理的代謝活化條件，可以更加科學(xué)地評價化合物的遺傳毒性。
　　我們應(yīng)用人淋巴瘤母細(xì)胞（TK6）建立了優(yōu)化的遺傳毒性組合試驗體系。在同一處理條件下的不同時間點對受試物分別進(jìn)行彗星試驗，體外微

2、核試驗和TK基因突變試驗。該體系的優(yōu)點為TK6細(xì)胞為人源細(xì)胞，與常用的小鼠細(xì)胞相比，p53基因表達(dá)正常；此外，體系具有良好特異性與敏感性，操作簡便；該檢測方法覆蓋了 DNA損傷、染色體異常和基因突變?nèi)齻€遺傳終點。在本研究中我們運用該試驗體系考察了中藥單體——漢防己甲素和雷公藤甲素的遺傳毒性。彗星試驗結(jié)果顯示漢防己甲素可能導(dǎo)致 DNA的斷裂，體外微核試驗表明雷公藤甲素可能導(dǎo)致染色體損傷，提示兩者都具有潛在的遺傳毒性。在致癌物代謝活化中，細(xì)

3、胞色素P450酶CYP1A1和CYP2E1是常見的兩種代謝酶。本研究應(yīng)用可穩(wěn)定表達(dá) CYP1A1的AHH-1細(xì)胞株和同時穩(wěn)定表達(dá)CYP1A1和CYP2E1的h2E1V2細(xì)胞株，建立了體外TK基因突變實驗體系，考察了環(huán)境致癌物丙烯酰胺通過CYP1A1和CYP2E1代謝后的遺傳毒性。試驗結(jié)果表明，丙烯酰胺對h2E1V2細(xì)胞具有致突變作用，表明CYP2E1在其代謝活化中發(fā)揮重要作用。
　　綜上所述，本研究建立了兩個優(yōu)化哺乳動物細(xì)胞的遺傳