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文檔簡介
1、遺傳毒性試驗(yàn)可以考察受試物是否具有潛在致癌性或者致突變性,是藥物毒性評(píng)價(jià)和環(huán)境致癌物研究的重要組成部分。建立一個(gè)具有良好特異性和敏感性并且操作簡便的體外試驗(yàn)體系,可以在藥物早期研發(fā)過程中提供重要的參考依據(jù),降低研發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。此外,在體外實(shí)驗(yàn)體系中采用合理的代謝活化條件,可以更加科學(xué)地評(píng)價(jià)化合物的遺傳毒性。
我們應(yīng)用人淋巴瘤母細(xì)胞(TK6)建立了優(yōu)化的遺傳毒性組合試驗(yàn)體系。在同一處理?xiàng)l件下的不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)受試物分別進(jìn)行彗星試驗(yàn),體外微
2、核試驗(yàn)和TK基因突變?cè)囼?yàn)。該體系的優(yōu)點(diǎn)為TK6細(xì)胞為人源細(xì)胞,與常用的小鼠細(xì)胞相比,p53基因表達(dá)正常;此外,體系具有良好特異性與敏感性,操作簡便;該檢測(cè)方法覆蓋了 DNA損傷、染色體異常和基因突變?nèi)齻€(gè)遺傳終點(diǎn)。在本研究中我們運(yùn)用該試驗(yàn)體系考察了中藥單體——漢防己甲素和雷公藤甲素的遺傳毒性。彗星試驗(yàn)結(jié)果顯示漢防己甲素可能導(dǎo)致 DNA的斷裂,體外微核試驗(yàn)表明雷公藤甲素可能導(dǎo)致染色體損傷,提示兩者都具有潛在的遺傳毒性。在致癌物代謝活化中,細(xì)
3、胞色素P450酶CYP1A1和CYP2E1是常見的兩種代謝酶。本研究應(yīng)用可穩(wěn)定表達(dá) CYP1A1的AHH-1細(xì)胞株和同時(shí)穩(wěn)定表達(dá)CYP1A1和CYP2E1的h2E1V2細(xì)胞株,建立了體外TK基因突變實(shí)驗(yàn)體系,考察了環(huán)境致癌物丙烯酰胺通過CYP1A1和CYP2E1代謝后的遺傳毒性。試驗(yàn)結(jié)果表明,丙烯酰胺對(duì)h2E1V2細(xì)胞具有致突變作用,表明CYP2E1在其代謝活化中發(fā)揮重要作用。
綜上所述,本研究建立了兩個(gè)優(yōu)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞的遺傳
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