微生態(tài)硒的制備及遺傳毒性的研究.pdf

1、硒具有抗氧化、提高機體免疫水平、緩解重金屬毒性、抗衰老、防癌抗腫瘤、抗心腦血管疾病等對人體及動物重要的生理功能。但我國卻缺硒現(xiàn)象嚴重,這已經(jīng)引起了人們的普遍認識和重視。硒添加劑的研究已成為國內(nèi)外研究的熱門課題,目前市場上的硒添加劑有無機硒如亞硒酸鈉和有機硒如硒代蛋氨酸兩大類,但是在一定程度上這些補硒劑都有副作用,且轉(zhuǎn)化率低。在人們越來越注重自身健康的今天,人們更期待安全高效的補硒劑。而微生態(tài)硒是通過微生物合成代謝作用,合成硒蛋白、硒氨基

2、酸、硒多糖等生物大分子,經(jīng)過超聲破碎透析后獲得這些生物大分子的混合物,這些有機化合物安全性高,更易被人體吸收轉(zhuǎn)化和利用。它的研究及商業(yè)化生產(chǎn)必定是人們健康補硒的福音。
　　實驗通過梯度平板和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng),從白地霉(Geotrichum candidum)、粘紅酵母(Rhodotorula glutinis)、假絲酵母(Candida Albicans)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)D254四株菌株中

3、得到釀酒酵母D254是合成微生態(tài)硒能力最強的菌株。測定不同硒濃度下,釀酒酵母D254的生物量與硒含量,初步確定在液體培養(yǎng)中硒濃度為70 mg/L-90 mg/L為最適合生產(chǎn)高硒釀酒酵母的濃度范圍。
　　培養(yǎng)基中添加不同濃度的硒,搖瓶發(fā)酵釀酒酵母 D254,用紫外分光光度法測定菌體超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶三種抗氧化酶的活性。研究不同硒濃度對釀酒酵母抗氧化酶活力的影響。結(jié)果表明,隨著硒濃度的升高三種抗氧化酶活性均

4、先升高后降低,且都在硒濃度為90 mg/L時,酶活力達到最大。實驗結(jié)果說明不同硒濃度對抗氧化酶活力影響不同,且在一定范圍內(nèi)硒濃度的升高可以提高菌體抗氧化酶的活力。
　　采用響應(yīng)面試驗方法,選擇硒添加量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、初始 pH、接種量、裝液量六個因素進行進行 Plackett-Burman試驗,研究影響微生態(tài)硒合成的主要因素;采用單因素試驗和最陡爬坡試驗確定各主要因素水平;采用三因素三水平的Box-Behnken試驗,以微生

5、態(tài)硒為響應(yīng)值,研究釀酒酵母 D254合成微生態(tài)硒的發(fā)酵條件。結(jié)果表明:硒添加量、初始 pH、培養(yǎng)溫度是影響微生態(tài)硒合成的主要因素;硒添加濃度與培養(yǎng)溫度的交互作用顯著,硒添加濃度與初始 pH、培養(yǎng)溫度與初始pH的交互作用不顯著;使用響應(yīng)優(yōu)化器分析獲得微生態(tài)硒的最佳培養(yǎng)條件為硒添加量81.3 mg/L、初始 pH6.3、培養(yǎng)溫度28.6℃,其預(yù)測微生態(tài)硒含量為1550.994μg/L,實測微生態(tài)硒含量為1544.165μg/L,兩者基本相符

6、。
　　微生態(tài)硒與硒代蛋氨酸遺傳毒理的比較實驗。選用 TA97、TA98、TA100、TA102四種菌株進行微生態(tài)硒和硒代蛋氨酸的Ames試驗。各設(shè)三個梯度0.015 mg/mL、0.03 mg/mL、0.06 mg/mL的實驗組,一個陰性對照組和一個陽性對照組。分別進行雌雄小鼠骨髓微核試驗和雄性小鼠精子畸變試驗。Ames試驗結(jié)果表明,微生態(tài)硒和硒代蛋氨酸對 TA97、TA98、TA100、TA102四種菌株均無致突變活性,說明在