乳腺癌多藥耐藥細胞株及敏感株抗原致敏樹突狀細胞介導的特異性抗腫瘤免疫研究.pdf

1、目的：樹突狀細胞(Dendriticcell，DC)是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的專職性抗原呈遞細胞(Antigen-presentingCells，APC)，是激發(fā)特異性免疫應答的中心環(huán)節(jié)和抗腫瘤免疫的重要載體。以DC為基礎的腫瘤疫苗在部分惡性腫瘤的治療中已顯示出良好的效果。腫瘤多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)是臨床腫瘤化療失敗的主要原因之一，大量研究證實腫瘤的生物治療對機體而言更為安全，不像化療、手術、放射等方法殺

2、傷腫瘤的同時也大量殺傷了正常細胞。因此我們設想是否能將P-gp作為腫瘤免疫治療的靶點，將其高表達的MDR腫瘤細胞凍融抗原沖擊致敏DC，誘導產(chǎn)生P-gp特異性細胞毒性T淋巴細胞(CytotoxicTlymphocyte，CTL)反應?以及產(chǎn)生的特異性CTL反應與藥物敏感腫瘤細胞抗原致敏的DC所誘導的CTL反應有何不同?故此，本實驗擬用人乳腺癌P-gp高表達耐藥細胞株MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7腫瘤凍融抗原沖擊致敏DC，探討其對殺

3、瘤活性的影響。 方法；采集健康供者骨髓血，用淋巴細胞分離液分離單個核細胞，應用重組人粒/單細胞集落刺激因(rhGM-CSF，1000U/ml)、重組人白介素-4(rhIL-4，500U/ml)和重組人腫瘤壞死因子-a(rhTNF-a，100ng/ml)聯(lián)合培養(yǎng)體系誘導骨髓單個核細胞產(chǎn)生DC，再以人乳腺癌P-gp高表達耐藥細胞株MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7腫瘤凍融抗原沖擊致敏DC，以光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀(F

4、ACS)檢測細胞免疫表型，MTT法檢測DC誘導CTL增殖及體外效應細胞殺傷活性。 結(jié)果；骨髓單個核細胞(BMMNC)經(jīng)體外擴增培養(yǎng)后，具有典型的樹突狀形態(tài)特征，流式細胞儀檢測細胞表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR表達率均較培養(yǎng)前明顯增高(P＜0.01)，經(jīng)抗原負載的DC能有效地激發(fā)外周血單個核細胞(PBMNC)中CD8+T細胞增殖(P＜0.01)。MCF-7/ADR-DC及MCF-7-DC均可介導針對靶細胞

5、MCF-7/ADR和MCF-7的細胞毒作用，明顯強于未經(jīng)腫瘤抗原致敏的DC組及T細胞組(P＜0.01)。在效靶比為20：1時，MCF-7/ADR-DC+T及MCF-7-DC+T對靶細胞MCF-7/ADR殺傷率分別為53.67±2.10％和41.83±1.63％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 結(jié)論；骨髓單個核細胞(BMMNC)經(jīng)細胞因子聯(lián)合培養(yǎng)體系(GM-CSF、IL-4、TNF-a)培養(yǎng)并經(jīng)P-gp高表達的MDR細胞株MC