腫瘤干細(xì)胞懸液致敏的樹突狀細(xì)胞對乳腺癌的治療作用研究.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：謝p I 歲年％月晴日江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：應(yīng)用腫瘤干細(xì)胞抗原致

2、敏樹突狀細(xì)胞，制備腫瘤干細(xì)胞D C 疫苗，探討腫瘤干細(xì)胞D C 疫苗對乳腺癌荷瘤小鼠的免疫治療作用，為樹突狀細(xì)胞疫苗的臨床試驗(yàn)提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：取對數(shù)生長期的4 T 1 細(xì)胞，用無血清懸浮培養(yǎng)法在體外誘導(dǎo)分離、擴(kuò)增4 T 1 小鼠乳腺癌干細(xì)胞。用流式檢測干細(xì)胞表面標(biāo)記C D 4 4 ，并用分化實(shí)驗(yàn)和成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定干細(xì)胞的特性。分別用無關(guān)蛋白、4 T 1 細(xì)胞和4 T 1 腫瘤干細(xì)胞凍融抗原致敏D C ，制備成D C ．無關(guān)蛋白疫苗

3、、D C ．4 T 1 疫苗和D C ．B C S C 疫苗，并用流式進(jìn)行D C 免疫表型的鑒定。用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)( M L R ) 進(jìn)行D C 功能的鑒定。建立B a l b ／c d x 鼠皮下4 T 1 E f L 腺癌移植瘤模型，經(jīng)尾靜脈注射D C 疫苗進(jìn)行治療，密切觀察腫瘤生長情況和小鼠生存時間。移植瘤行H E 染色和免疫組織化學(xué)染色檢測C D 8 + T淋巴細(xì)胞浸潤情況。T r a n s w e l l 侵襲實(shí)驗(yàn)觀察各組

4、移植瘤中腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果：4 T 1 在無血清培養(yǎng)條件下，呈懸浮成球生長。流式結(jié)果顯示，經(jīng)S F M 誘導(dǎo)后的第1 、2 、3 、4 代腫瘤細(xì)胞微球體中C D 4 4 + ／C D 2 4 。細(xì)胞比例逐代升高，均顯著高于4 T 1 組( P < 0 ．0 5 ) 。成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與4 T 1 細(xì)胞相比，4 T 1 干細(xì)胞成瘤早且快，皮下移植瘤體積大。B C S C 微球體在含血清培養(yǎng)基中可重新分化為普通腫瘤細(xì)胞。未成熟D

5、C 的樹突短且少。D C 經(jīng)抗原致敏成熟后，突起數(shù)量增多且伸長。F C M 檢測結(jié)果顯示，未經(jīng)致敏的D C 低表達(dá)C D 8 0 、C D 8 6 、M H C I I 及C D l l c ，經(jīng)腫瘤細(xì)胞抗原致敏后，表達(dá)明顯升高( P < 0 ．0 5 ) 。M L R 結(jié)果：D C ：T 細(xì)胞相同條件下，D C ．B C S C 刺激T 細(xì)胞的刺激指數(shù)高于D C ．無關(guān)蛋白與D C ．4 T 1 的刺激指數(shù)( P < 0