聯(lián)合應用選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑NS-398和脂氧合酶抑制劑NDGA對人肝癌細胞株HepG-2增殖及凋亡的影響.pdf

1、肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國常見的惡性腫瘤之一，近二十年來，我國HCC的死亡率增加了41.7％，約占全世界HCC死亡人數的42％。目前，手術切除仍是治療HCC的最佳手段，但本病起病隱匿，病情發(fā)展迅速，大多數患者就診時已發(fā)展到中晚期，失去了手術治療的機會，患者5年生存率低于％。環(huán)氧合酶(cylooxygenases,COX)和脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)是體內催化花生四烯酸

2、(arachidonic acid，AA)代謝的兩個關鍵酶。細胞膜上的磷脂在磷脂酶A2作用下釋放出AA，AA經COX和LOX兩條通路代謝產生一系列的生物活性物質，如前列腺素(PG)、血栓烷素A2(TXA2)、羥基廿碳四烯酸(HETEs)和白細胞三烯(LTs)等。通過這些活性物質，COX及LOX影響細胞信號轉導及代謝，進而對包括腫瘤，炎癥在內的多種疾病產生作用。NS-398是一種選擇性COX-2抑制劑，與傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥(nonste

3、roidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)不同的是其抑制COX-1的作用非常弱，從而減輕了胃腸道的不良反應。目前其已被發(fā)現(xiàn)能夠抑制肝癌細胞增殖和誘導細胞周期阻滯。LOX抑制劑NDGA對于人肝癌細胞株HepG2細胞具有明顯生長抑制作用，同時還可以誘導HepG2細胞凋亡，引起細胞周期被阻滯于G1/S期。本研究選用人肝癌細胞株：HepG2作為研究對象，探討NS-398和NDGA聯(lián)合應用對人肝癌細胞的增殖抑制和

4、誘導凋亡作用及對bcl-2mRNA表達的影響，為將NS-398和NDGA聯(lián)合應用于HCC的治療提供初步的實驗依據。 目的： 探討單獨和聯(lián)合應用選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑(cyclooxygenase-2 selectiveinhibitor)NS-398和脂氧合酶抑制劑(lipoxygenase inhibitor)NDGA對于人肝癌細胞株HepG2的增殖、凋亡和對bcl-2mRNA表達的影響。 方法： (

5、1)采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測單獨及聯(lián)合應用NS-398和NDGA對于人肝癌細胞株HepG2的增殖抑制作用并應用金正均法判斷兩藥的相互作用。 (2)采用DNA末端原位標記染色法(TUNEL法)觀察藥物作用后人肝癌細胞株HepG2的形態(tài)學改變并計算凋亡指數(apoptosis index，AI)。 (3)采用流式細胞術檢測藥物作用后對于人肝癌細胞株HepG2細胞凋亡率。 (4)采用RT-PCR檢測藥物作

6、用后人肝癌細胞株HepG2中bcl-2 mRNA的表達。 結果： (1)MTT結果顯示NS-398(20～160μmol/L)或NDGA(25~200μmol/L)單獨應用對人肝癌細胞株HepG2均有增殖抑制作用，藥物濃度越高，抑制作用越強，呈現(xiàn)明顯的劑量效應關系。系列濃度NS-398或NDGA作用于細胞24h、48h、72h后觀察細胞的生長情況，結果顯示NS-398或NDGA作用時間越長，對上述細胞的抑制作用越強，呈明

7、顯的時間效應關系。依據金正均法NS-398在20～160μmol·L-1濃度范圍內與NDGA 25~100 μmol·L-1濃度范圍內及NS-398 20 μmol·L-1與NDGA 200 μmol·L-1聯(lián)合應用顯示出協(xié)同作用(q>1.15)，余濃度聯(lián)合應用顯示相加作用(0.85

8、S-398(160μmol/L)和NDGA(200μmol/L)單獨和聯(lián)合應用48h后均可誘導人肝癌細胞株HepG2發(fā)生凋亡，凋亡細胞胞核成棕色，核固縮，大小不一；非凋亡細胞細胞核淡藍紫色，核形態(tài)大小較一致。聯(lián)合用藥組較各單獨用藥組及對照組凋亡指數增高。 (3)流式細胞術結果顯示經NS-398(160μmol/L)和NDGA(200μmol/L)單獨和聯(lián)合應用48h后均可誘導人肝癌細胞株HepG2發(fā)生凋亡，在DNA直方圖上G0/

9、G1期前可見亞G1峰即凋亡峰，NS-398與NDGA聯(lián)合應用48h后凋亡率明顯高于各單獨用藥組，提示兩藥合用對誘導人肝癌細胞株HepG2凋亡有協(xié)同作用。 (4)RT-PCR檢測bcl-2 mRNA的結果顯示NS-398(160μmol/L)或NDGA(200μmol/L)單獨和聯(lián)合用藥48h后HepG2細胞bcl-2 mRNA的表達均降低，兩藥聯(lián)合用藥組人肝癌HepG2細胞bcl-2 mRNA表達明顯低于NS-398或NDGA單

10、獨用藥組，差異具有顯著性(P<0.01)。 結論： (1)單獨應用NS-398或NDGA對于人肝癌細胞株HepG2均有增殖抑制作用，且呈劑量和時間效應關系。NS-398和NDGA聯(lián)合用藥對人肝癌細胞株HepG2的增殖抑制具有協(xié)同作用。 (2)單獨應用NS-398或NDGA對于人肝癌細胞株HepG2均有誘導凋亡作用；NS-398和NDGA聯(lián)合用藥對于人肝癌細胞株HepG2有協(xié)同誘導凋亡作用，并可能與抑制bcl-2-