脂氧合酶抑制劑NDGA對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞增殖和凋亡影響的實驗研究.pdf

1、背景:神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最為常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害兒童的身心健康。由于現(xiàn)有的各種治療方法臨床療效不佳，開發(fā)新的抗腫瘤藥物是全球醫(yī)藥工作者所面臨的一項重要任務(wù)。在最近的幾十年里，細(xì)胞的誘導(dǎo)分化治療得到廣泛的研究。我們既往研究發(fā)現(xiàn)，去甲二氫愈創(chuàng)木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)對膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外生長具有顯著的抑制作用，但其體外抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤作用研究較少。 目的

2、: 本實驗通過脂氧合酶抑制劑去甲二氫愈創(chuàng)木酸作用于體外培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-SH，研究NDGA對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的生長抑制作用及其可能機(jī)制，為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的防治探索新依據(jù)。 方法: 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-SH于體外培養(yǎng)，每日在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。不同濃度NDGA處理細(xì)胞，于作用的不同時間收集細(xì)胞，采用MTT比色法、腫瘤細(xì)胞計數(shù)、集落形成實驗探討NDGA對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-

3、SH的增殖是否有抑制作用，HE染色、流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL染色技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分析。 結(jié)果: (1)MTT比色法、腫瘤細(xì)胞計數(shù)等顯示NDGA明顯抑制體外培養(yǎng)的SK-N-SH細(xì)胞的增殖，并隨著濃度的增加和時間的延長而增強，以100μmol/lNDGA作用抑制率最高，達(dá)63.6％，各組細(xì)胞集落形成率分別為74.8％、23.2％。 (2)NDGA(5μmol/l、100μmol/l)作用于SK-N-SH細(xì)胞7

4、2小時后，可觀察到細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。HE染色見凋亡細(xì)胞皺縮，核染色質(zhì)濃縮深染，胞質(zhì)嗜伊紅染增強。 (3)FCM和TUNEL染色一致顯示，NDGA(5 μmol/l、100μmol/l)分別作用于SK-N-SH細(xì)胞48小時和72小時均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但NDGA對細(xì)胞周期無明顯影響。 結(jié)論: (1)NDGA對體外培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-SH的生長和增殖有抑制作用，呈劑量依賴性和時間依賴性。