NGF對(duì)人癲癇腦神經(jīng)細(xì)胞及Egr-1表達(dá)的影響.pdf

1、[目的] 了解癲癇患者腦脊液中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)水平，研究不同濃度NGF對(duì)人癲癇腦海馬CA。區(qū)神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)，以及星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元存活數(shù)量的影響，同時(shí)研究了不同濃度NGF對(duì)神經(jīng)細(xì)胞Egr-ImRNA表達(dá)的影響，以探討NGF對(duì)癲癇腦損傷神經(jīng)細(xì)胞作用和機(jī)制。 [方法] 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-1inked immunosorbent assay，ELISA)分別

2、測(cè)定癲癇組(n=28)及非癲癇對(duì)照組(n=21)腦脊液中NGF水平；采用解離細(xì)胞即刻培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)經(jīng)檢查癇樣放電起源于顳葉或海馬，而病理檢查未發(fā)現(xiàn)特異病理改變的人癲癇海馬CA1的神經(jīng)細(xì)胞(n=16)進(jìn)行培養(yǎng)，并設(shè)立濃度分別為12.5，50，100 ng/ml的NGF加藥組和未加NGF的空白對(duì)照組，培養(yǎng)4h后，通過(guò)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法，以雙苯酰亞胺(Bisbenzimide，Bb)染核，聯(lián)合細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白GFAP、MAP：標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞

3、、神經(jīng)元，計(jì)數(shù)存活的神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)，及星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元數(shù)，并計(jì)算星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元占總神經(jīng)細(xì)胞的百分比，同時(shí)利用RT-PCR技術(shù)半定量分析不同濃度NGF對(duì)神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因-1(early growth response gene-1，Egr-1)mRNA的影響。 [結(jié)果] 1.癲癇組和非癲癇對(duì)照組腦脊液中NGF含量分別(27.31±6.36)pg/ml、(24.09±4.96)pg/ml，兩組中腦脊液NG

4、F水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 2.在NGF濃度為12.5、50、100ng/ml時(shí)，海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)分別為(82.02±11.08)、(104.71±14.24)、(127.11±14.35)個(gè)/視野，與未加NGF的空白對(duì)照組(67.71±9.21)個(gè)/視野相比，差異具有顯著性意義(P<0.01)，神經(jīng)元存活總數(shù)隨NGF濃度增高而增加，與NGF劑量呈量效關(guān)系(P<0.01)。 3.當(dāng)NGF濃度為O、12.5

5、、50、100ng/ml時(shí)，GFAP(+)的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)分別為(23.11±4.39)、(30.73±5.16)、(44.25±6.76)、(59.57±6.23)個(gè)/視野；而MAP2(+)神經(jīng)元數(shù)分別為(8.82±1.74)、(14.81±2.87)、(22.51±3.10)、(32.17±2.52)個(gè)/視野，星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元存活數(shù)與NGF劑量呈量效關(guān)系，隨NGF濃度增高而增加(P<0.05)。 4.隨著NGF濃度的升高

6、，星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元占神經(jīng)細(xì)胞百分比有所升高，顯示出相同的增高趨勢(shì)。NGF濃度分別為0、12.5、50、100ng/ml時(shí)，GFAP(+)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和MAP2(+)的神經(jīng)元占神經(jīng)細(xì)胞百分比中位數(shù)(四分位間距)分別為34.94(31.16～36.91)％、38.49(34.70～39.94)％、42.36(40.22～45.13)％、45.92(43.79～51.53)％和13.01(10.65～15.55)％、18.35(16.3

7、7～19.92)％、21.94(21.36～22.84)％、25.33(23.98～26.84)％；比較不同濃度的NGF對(duì)GFAP(+)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和MAP2(+)的神經(jīng)元占神經(jīng)細(xì)胞百分比改變的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，差別無(wú)顯著意義(P>0.05)。 5.當(dāng)NGF濃度為O、12.5、50、100ng/ml時(shí)，神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)Egr-1mRNA即ABgr-1/AB-actin分別為(0.46±0.14)、(0.63±0.14)、(0.80±0.

8、15)、(1.12±0.12)，加藥組與未加NGF對(duì)照組比較，存在顯著性差異(P<0.01)，同樣神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)Egr-1mRNA量與NGF劑量呈量效關(guān)系，隨NGF濃度增高而表達(dá)量增加(P<0.01)。且在NGF作用下，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)與相應(yīng)表達(dá)的Egr-1mRNA的量成正相關(guān)(r=0.780，P<0.01)。 [結(jié)論] 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)難治性癲癇人腦脊液中NGF水平較非癲癇對(duì)照組無(wú)明顯升高；在(12.5～100)ng/ml范圍內(nèi)時(shí)，

9、NGF可提高體外培養(yǎng)人癲癇腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)，及GFAP(+)星形膠質(zhì)細(xì)胞和MAP2(+)神經(jīng)元數(shù)量，這一作用與NGF濃度的升高呈正相關(guān)，提示了NGF對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用；比較不同濃度的NGF對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元存活率的提升作用，均顯示無(wú)顯著差異，提示了NGF對(duì)人癲癇海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元均有保護(hù)作用；NGF對(duì)神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)Egr-1mnRNA有促進(jìn)作用，其表達(dá)量的增加與NGF濃度呈正的量效關(guān)系，提示了Egr-1在NG