I2PP2A協(xié)同調(diào)節(jié)p53和Akt抑制神經(jīng)元凋亡.pdf

1、本文主要從經(jīng)下幾個(gè)部分展開：
　　 第一部分：背景：阿爾茨海默病（AD）病人腦中神經(jīng)元的慢性缺失是一種重要的病理變化。即使暴露于豐富促凋亡因子的環(huán)境中，絕大多數(shù)神經(jīng)元卻沒有發(fā)生凋亡，而發(fā)生慢性退行性變性，其機(jī)制目前仍不清楚。I2(I2 PP2A）是一種內(nèi)源性的PP2A抑制劑，在AD 病人腦中表達(dá)明顯增加，但其對于AD 腦中神經(jīng)元的缺失所起的作用目前還不明確。
　　 目的：研究I2 PP2A 在AD 腦中多數(shù)神經(jīng)元細(xì)胞不發(fā)

2、生凋亡中的作用。
　　 方法：通過HEK293和N2a 細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-I 2 PP2A 或pSUP-siI 2 PP2A 質(zhì)粒，采用western Blotting和實(shí)時(shí)定量PCR 檢測p53、Akt的蛋白和mRNA表達(dá)水平；構(gòu)建eGFP 標(biāo)記的lenti-siI 2 PP2A，腦立體定位注射tg2576 轉(zhuǎn)基因鼠的海馬和皮質(zhì)，檢測I2 PP2A、p53和Akt 在AD模型中的蛋白表達(dá)水平；染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)和lu

3、ciferase 檢測蛋白I2 PP2A 對p53及Akt 轉(zhuǎn)錄活性的作用。
　　 結(jié)果：（1）I2 PP2A 調(diào)節(jié)活體內(nèi)外p53的表達(dá)（2）過表達(dá)I2 PP2A 增強(qiáng)p53的轉(zhuǎn)錄活性（3）上調(diào)I 2 PP2A 通過p38 MAPK 磷酸化p53，使p53活性增高，但細(xì)胞不發(fā)生凋亡（4）I2 PP2A 調(diào)節(jié)Akt的表達(dá)，過表達(dá)I2 PP2A 增強(qiáng)Akt的轉(zhuǎn)錄活性（5）上調(diào)I2 PP2A同時(shí)抑制Akt活性，可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡（6）在A

4、D 腦及Tg2576 轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)，I2 PP2A、p53、Akt 同步變化。
　　 結(jié)論：I2 PP2A表達(dá)水平增高，可通過上調(diào)p53 水平引起凋亡，但由于同時(shí)激活A(yù)kt，從而阻止了神經(jīng)元發(fā)生凋亡。
　　 第二部分：背景：阿爾茨海默?。ˋlzheimer's Disease，AD）是最常見的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征是在腦中出現(xiàn)神經(jīng)原纖維纏結(jié)和老年斑。越來越多的研究表明，血漿中同型半胱氨酸水平增高可增加患阿爾茨海默

5、病的危險(xiǎn)性，我們以前的研究表明，高同型半胱氨酸血癥可導(dǎo)致成年大鼠出現(xiàn)阿爾茨海默樣病理改變，但是高同型半胱氨酸血癥對于老年大鼠所起到的作用目前仍不明確。
　　 目的：探討慢性高同型半胱氨酸血癥對老年大鼠腦內(nèi)tau蛋白結(jié)構(gòu)和功能的作用以及其可能機(jī)制。
　　 方法：選取18月齡健康大鼠，尾靜脈注射同型半胱氨酸生理鹽水溶液(1.6mg/kg/day）制造高同型半胱氨酸血癥模型組，在給予同型半胱氨酸的同時(shí)通過飲用水給予葉酸(4mg

6、/kg/day)和維生素B12(vit-B12 250(g/kg/day)作為治療組，單純注射生理鹽水作為對照組，持續(xù)六個(gè)月。采用Morris 水迷宮檢測大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力；western blots 檢測tau的磷酸化水平及相關(guān)激酶酯酶的變化；免疫組織化學(xué)和Bielschowsky 銀染觀察磷酸化tau的分布和聚集；同時(shí)檢測tau的可溶性和與微管的結(jié)合能力。
　　 結(jié)果：（1）血漿中同型半胱氨酸水平增高對老年大鼠的學(xué)習(xí)能力沒有

7、影響，但可導(dǎo)致記憶障礙；給予葉酸和維生素B12能夠有效改善老年大鼠的記憶障礙；（2）血漿高同型半胱氨酸水平誘導(dǎo)老年大鼠腦內(nèi)tau蛋白在S214、T231、S396、S396/404位點(diǎn)磷酸化水平升高；（3）血漿高同型半胱氨酸水平降低了tau的可溶性和與微管結(jié)合能力，導(dǎo)致tau的聚集；（4）血漿高同型半胱氨酸水平激活蛋白激酶A(PKA)、糖原合酶激酶-3 β(GSK-3 β)、周期蛋白依賴激酶-5(Cdk-5）、c-Jun氨基端激酶（JN