iNOS抑制劑誘導(dǎo)宮頸癌和卵巢細(xì)胞凋亡及調(diào)節(jié)p53通路的相關(guān)研究.pdf

1、背景:
　　宮頸癌和卵巢癌是常見的婦科腫瘤，嚴(yán)重威脅著女性的健康。目前除了手術(shù)治療，系統(tǒng)性化療仍是晚期宮頸癌和卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。順鉑(cisplatin，DDP)及鉑類衍生物作為一線化療藥物而被廣泛應(yīng)用，但是其毒性反應(yīng)及耐藥性是導(dǎo)致治療失敗的主要障礙。誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase，iNOS)和p53的表達(dá)在宮頸癌和卵巢癌細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)和疾病轉(zhuǎn)歸中起著關(guān)鍵性的作用。然而在宮頸癌

2、和卵巢癌中抑制iNOS能否影響腫瘤細(xì)胞增殖，以及p53通路相關(guān)分子調(diào)節(jié)機(jī)制的變化有待進(jìn)一步研究。
　　目的:
　　本研究主要探討iNOS抑制劑聯(lián)合DDP對于宮頸癌和卵巢癌細(xì)胞的生長抑制作用，并進(jìn)一步研究其對p53通路調(diào)節(jié)的相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:
　　使用宮頸鱗癌細(xì)胞系SiHa細(xì)胞和上皮性卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-3細(xì)胞進(jìn)行實驗研究。兩種細(xì)胞分別用DDP或N-[3-（氨甲基）芐基]乙脒(N-(3-(aminome

3、 thyl)benzyl) acetamidine，1400w)處理24-48小時，設(shè)對照組、1400W組、DDP組及1400W+DDP組。MTT及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞存活率。通過檢測caspase-3活性來進(jìn)一步檢測細(xì)胞凋亡情況。使用Western-blot和real-timePCR對p53、MDM2和DNA依賴蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase，DNA-PK)蛋白以及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)進(jìn)行檢測。用SPSS17

4、.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析，使用單因素方差分析，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　用1400W預(yù)處理能明顯增強(qiáng)DDP對SiHa細(xì)胞的增殖抑制作用，而對OVCAR-3細(xì)胞的增殖抑制作用不明顯。兩種細(xì)胞系使用1400W處理后caspase-3活性均明顯增強(qiáng)。此外，兩種細(xì)胞系中1400W+DDP組的p53表達(dá)明顯低于其他三組。在SiHa細(xì)胞中，1400W+DDP組的MDM2表達(dá)明顯上調(diào)，而在OVCAR-3細(xì)胞中140

5、0W+DDP組的MDM2表達(dá)則明顯降低。兩種細(xì)胞系中1400W+DDP組的DNA-PK表達(dá)明顯高于DDP組。這三種基因的蛋白表達(dá)的差異明顯大于mRNA表達(dá)差異。
　　結(jié)論:
　　1.在SiHa細(xì)胞中1400W能夠有效增強(qiáng)DDP的細(xì)胞毒性作用。而在OVCAR-3細(xì)胞中，1400W沒有明顯增強(qiáng)DDP的細(xì)胞毒性作用。
　　2.1400W誘導(dǎo)SiHa和OVCAR-3細(xì)胞凋亡機(jī)制不同，在SiHa細(xì)胞中通過上調(diào)MDM2表達(dá)來下調(diào)p