靶向mTOR聯(lián)合化療藥物對SGC7901-DDP細(xì)胞生長影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究mTOR特異性抑制劑RAD001聯(lián)合順鉑對SGC7901/DDP細(xì)胞的生長抑制作用，并探討其相關(guān)作用機(jī)制。
　　 方法：胃癌SGC7901/DDP細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、500ng/ml順鉑、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，給予RAD001、順鉑干預(yù)，1．MTT法檢測各組細(xì)胞24h、48h、72h體外增殖情況；2．HE染色觀察藥物作用48h后各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；3．電鏡觀察藥物

2、作用48h后SGC7901/DDP細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；4．流式細(xì)胞術(shù)檢測各用藥組作用于SGC7901/DDP細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡率；5．免疫細(xì)胞化學(xué)染色及Western-blot檢測各組細(xì)胞中P-gp、MRP1、Survivin、Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1．DDP單獨(dú)應(yīng)用對SGC7901/DDP細(xì)胞增殖無抑制作用，與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。RAD001單獨(dú)作用于SGC7901/DDP細(xì)胞

3、后，細(xì)胞增殖受到不同程度抑制，當(dāng)濃度達(dá)到2.5nmol/L時，對細(xì)胞的抑制效應(yīng)與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。RAD001預(yù)處理細(xì)胞2h后聯(lián)合DDP作用，藥物對細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)與對照組、DDP組及RAD001組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；2．RAD001組、聯(lián)合組作用于SGC7901/DDP細(xì)胞后，細(xì)胞稀疏，細(xì)胞呈現(xiàn)體積變小、形態(tài)不規(guī)則、胞漿濃縮、胞核固縮等形態(tài)學(xué)表現(xiàn)；3．電鏡觀察藥物作用48h后細(xì)胞超微結(jié)

4、構(gòu)的改變，RAD001(5、10nmol/L)組以及聯(lián)合組細(xì)胞體積縮小，胞漿電子密度增高，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，相鄰細(xì)胞間的細(xì)胞連接消失，細(xì)胞突起減少，部分細(xì)胞內(nèi)可見凋亡小體；4．SGC7901/DDP細(xì)胞對DDP促凋亡作用呈現(xiàn)抵抗現(xiàn)象。RAD001(5、10nmol/L)組細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，凋亡率與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。RAD001預(yù)處理細(xì)胞后聯(lián)合DDP作用，細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡現(xiàn)象，凋亡率與對照組、DDP組及RAD

5、001組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；5．免疫細(xì)胞化學(xué)及Western-blot檢測結(jié)果顯示：DDP單獨(dú)作用于SGC7901/DDP細(xì)胞，各蛋白表達(dá)情況與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；RAD001作用于SGC7901/DDP細(xì)胞，細(xì)胞中P-gp、MRP1、Survivin和Bcl-2蛋白的表達(dá)下降，Bax表達(dá)升高，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。RAD001預(yù)處理后與DDP聯(lián)合作用于SGC790