SKI-Ⅱ?qū)GC7901-DDP逆轉(zhuǎn)耐藥作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討神經(jīng)鞘氨醇激酶抑制劑SKI-Ⅱ(Sphingosine kinase inhibitorⅡ，SKI-Ⅱ)逆轉(zhuǎn)SGC7901/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的耐藥作用及其機(jī)制。
　　方法：人胃癌順鉑耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP分別進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)(SKI-Ⅱ(umol/L)+DDP(mg/L)(0+0；0+2.5；1.25+0；1.25+2.5；5+0；5+2.5:10+0；10+2.5))及在無(wú)菌條件下接種于4周齡的BALB/C裸

2、鼠皮下建立移植瘤模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(對(duì)照組、DDP組(2.5 mg/kg)、SKI-Ⅱ組(0.3mg/kg)、DDP+SKI-Ⅱ(2.5mg/kg+0.3mg/kg))：1.四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞48h體外增殖情況并計(jì)算其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)；2.免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)各組細(xì)胞及腫瘤組織中P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK的蛋白表達(dá)情況；3.免疫印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞及腫瘤組織中P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK的蛋白表達(dá)水平；4.

3、比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)及腫瘤組織內(nèi)GSH含量及細(xì)胞內(nèi)GST活力；5.RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中MRP1及GST mRNA基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.MTT結(jié)果顯示：各組藥物作用于SGC7901/DDP細(xì)胞48h后，測(cè)定SKI-Ⅱ?qū)GC7901/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.615。2.所有接種人胃癌細(xì)胞系SGC7901/DDP的裸鼠均成瘤，稱量裸鼠腫瘤重量，聯(lián)合用藥組腫瘤重量明顯較對(duì)照及單獨(dú)用藥組減輕；3.免疫細(xì)胞化學(xué)染色及Western

4、 blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，DDP單用組P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)；一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合DDP組P-gp、MRP1、p-ERK、p-JNK蛋白表達(dá)較對(duì)照組減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)用藥組(P<0.05)。4.比色法結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，DDP單用組細(xì)胞內(nèi)及腫瘤組織內(nèi)GSH、GST含量無(wú)明顯差異(P>0.05)，而一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合

5、DDP組表達(dá)減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)用藥組(P<0.05)。5.RT-PCR法結(jié)果顯示：各用藥組作用48小時(shí)后，DDP組細(xì)胞內(nèi)GST及MRP1 mRNA基因表達(dá)情況與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)，一定劑量的SKI-Ⅱ單用組及聯(lián)合DDP組與陰性對(duì)照組相比細(xì)胞內(nèi)GST及MRP1 mRNA基因表達(dá)減少(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組比單獨(dú)用藥組表達(dá)亦減少(P<0.05)。
　　結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下得出以下