KIAA0157和Hepassocin調(diào)節(jié)肝源性細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、細(xì)胞的增殖調(diào)控是生命體賴以生存和發(fā)展的基礎(chǔ)，對(duì)細(xì)胞的增殖調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究能夠?yàn)槟[瘤的治療提供新的藥物靶點(diǎn)，并能為藥物的研發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。本論文就兩個(gè)對(duì)細(xì)胞增殖起調(diào)控作用的蛋白KIAA0157和Hepassocin調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的機(jī)制進(jìn)行研究。
　　 KIAA0157是一種功能不明的新基因。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)KIAA0157在多種腫瘤組織中下調(diào)表達(dá)，過(guò)表達(dá)可抑制多種細(xì)胞的克隆形成能力。本論文研究發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)KIAA0157能增強(qiáng)p5

2、3的穩(wěn)定性和p53活性，RNAi下調(diào)細(xì)胞內(nèi)KIAA0157表達(dá)加速p53降解，抑制p53活性；KIAA0157以p53依賴的方式抑制細(xì)胞集落形成并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生G0期阻滯。KIAA0157可與MDM2發(fā)生相互作用，并抑制MDM2介導(dǎo)的p53泛素化和降解。這些研究結(jié)果表明KIAA0157可能通過(guò)MDM2調(diào)節(jié)p53穩(wěn)定性及其活性，并在腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控方面發(fā)揮作用，為今后的癌癥治療提供了新的靶點(diǎn)。
　　 Hepassocin(HPS)，

3、是一種肝臟特異表達(dá)蛋白質(zhì)，在肝損傷修復(fù)、肝源細(xì)胞增殖調(diào)控中發(fā)揮重要作用。前期研究表明HPS可特異性刺激正常肝細(xì)胞增殖，但過(guò)表達(dá)抑制肝腫瘤細(xì)胞增殖，其分子機(jī)制不明。我們的研究發(fā)現(xiàn)：1)采用免疫印跡和ELISA方法證明正常肝細(xì)胞系L02細(xì)胞能夠產(chǎn)生并分泌HPS；2)HPS蛋白質(zhì)的細(xì)胞外分泌依賴于N端22個(gè)氨基酸。3)利用FITC標(biāo)記的HPS證實(shí)L02細(xì)胞膜上存在HPS特異受體；4)HPS中和抗體可中和L02細(xì)胞條件培養(yǎng)液的增殖刺激活性并抑制

4、L02細(xì)胞增殖。這些研究表明HPS可通過(guò)自分泌循環(huán)調(diào)節(jié)L02細(xì)胞增殖，阻斷這個(gè)循環(huán)可抑制L02細(xì)胞的增殖。為研究HPS對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，我們?cè)贖epG2肝癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)野生型HPS和N端22個(gè)氨基酸缺失HPS(非分泌型HPS)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種HPS均可抑制HepG2細(xì)胞的克隆形成能力，并導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，但非分泌型HPS的抑制作用要顯著強(qiáng)于野生型HPS。此外，雖然HepG2肝癌細(xì)胞也產(chǎn)生和分泌HPS，但外源HPS對(duì)肝癌細(xì)胞