HBV-Alu-PCR對(duì)乙肝相關(guān)性肝癌中HBV整合位點(diǎn)的研究.pdf

1、目的：了解乙型肝炎病毒(HBV)感染與肝細(xì)胞癌(HCC)的關(guān)系，探討乙型肝炎病毒(HBV)在肝細(xì)胞染色體上的整合規(guī)律及其在肝癌形成中的作用，了解肝細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)制。應(yīng)用HBV-Alu-PCR方法檢測(cè)肝細(xì)胞癌(HCC)中HBVDNA整合。 方法:提取乙肝相關(guān)性肝癌組織標(biāo)本中的DNA為模板，設(shè)計(jì)HBV的亞基因片段X、C、S的引物以檢測(cè)其中的HBVDNA，這個(gè)產(chǎn)物包括游離形式的和整合形式的HBVDNA；然后再設(shè)計(jì)HBV的上游序列和人類

2、基因組Alu重復(fù)序列為引物，設(shè)計(jì)的引物中引入U(xiǎn)堿基，應(yīng)用巢式PCR的原理，利用降落PCR技術(shù)，使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法擴(kuò)增出整合形式的HBV基因片段及其側(cè)翼的人基因組DNA片段，建立克隆整合的HBVDNA及其相鄰的細(xì)胞基因序列的PCR技術(shù)。PCR產(chǎn)物送生物公司測(cè)序，所獲結(jié)果經(jīng)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(national center forbiotechnology information NCBI)BLAST及MapVi

3、ewer檢索確定HBV整合在染色體上的精確位置。 結(jié)果:24份例HBsAg陽(yáng)性的肝癌組織中，通過(guò)HBV-PCR方法幾乎均能檢測(cè)到HBV的X區(qū)和前C區(qū)，S區(qū)的檢測(cè)率也達(dá)70.8％(17/24)；使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法發(fā)現(xiàn)有15份存在HBVDNA整合現(xiàn)象，整合的標(biāo)本中有11份正向插入宿主基因中，8份反向插入宿主基因中，其中有5份標(biāo)本既有正向插入也有反向插入，從病毒基因分析，整合可發(fā)生于X基因的任何長(zhǎng)度，且均以截短