健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞干預(yù)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發(fā)展速度快、惡性程度高、預(yù)后差、生存期短，嚴(yán)重威脅到人類的身心健康。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療手段的發(fā)展，癌腫局部治療方面的優(yōu)勢(shì)已非常突出，但在綜合評(píng)估患者生存質(zhì)量、生存期和遠(yuǎn)期療效等方面仍然不盡人意。因此，著眼于整體以及整體病機(jī)對(duì)腫瘤形成和演變的影響，日益受到重視。越來越多的證據(jù)表明，中醫(yī)藥在改善肝癌患者的免疫狀態(tài)、提高生存率方面有著獨(dú)特的療效。在中醫(yī)藥防治肝癌的臨床實(shí)踐中，應(yīng)用與研究較多的為健脾理氣法

2、。健脾理氣方藥是該院臨床多年來一直應(yīng)用的一種有效的抗癌方劑，由人參、黃芪、云苓、白術(shù)、升麻、陳皮、柴胡、當(dāng)歸八味中藥組成。從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)入手，探討該方劑對(duì)肝癌細(xì)胞的干預(yù)機(jī)制可為中醫(yī)藥治療肝癌提供可靠的科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：建立小鼠脾虛肝郁的動(dòng)物模型，再選用小鼠Hca-F腹水型肝癌細(xì)胞株，制作移植瘤動(dòng)物模型。造模形成實(shí)體瘤后將小鼠隨機(jī)分成荷瘤對(duì)照組、健脾理氣方藥組、環(huán)磷酰胺組和健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺組，各組分別以生理鹽水、健脾理氣方

3、藥、環(huán)磷酰胺、健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺灌胃。另設(shè)正常對(duì)照組，以生理鹽水灌胃。停藥后24小時(shí)取材。應(yīng)用光鏡技術(shù)觀察健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+的影響；應(yīng)用光鏡-酶細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠外周血淋巴細(xì)胞Mg2+-ATP酶與G-6-P酶活性的影響；應(yīng)用電鏡技術(shù)與TUNEL法檢測(cè)健脾理氣

4、方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡的影響；應(yīng)用原位雜交法檢測(cè)健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞端粒酶活性的影響；應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)健脾理氣方藥對(duì)Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞突變型p53、Bcl-2、C-myc基因蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1．光鏡下觀察，各實(shí)驗(yàn)組與腫瘤對(duì)照組比較，癌細(xì)胞排列較規(guī)整，體積變小。病理性核分裂較少，染色質(zhì)濃縮，密度增高。間質(zhì)可見較多的淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管內(nèi)腫瘤細(xì)胞少

5、見。周圍壞死灶面積增大。
　　 2．健脾理氣方藥組抑瘤率為26.8％，健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺組抑瘤率為38.8％。說明健脾理氣方藥可以抑制腫瘤生長，且與環(huán)磷酰胺合用后抑瘤效果明顯增強(qiáng)。
　　 3．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，各治療組在用藥后CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+與荷瘤對(duì)照組相比均有明顯升高，CD8+T細(xì)胞較用藥前降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，健脾理氣方藥組、健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺組與環(huán)磷酰胺組相比，其治療效果均無顯著

6、性差異。
　　 4．光鏡-酶細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果表明，與荷瘤對(duì)照組比較，各治療組外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)Mg2+-ATP酶、G-6-P酶活性明顯增強(qiáng)，Mg2+-ATP酶、G-6-P酶陽性細(xì)胞率與荷瘤對(duì)照組比較差異顯著，各治療組之間上述兩種指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5．電鏡下觀察，可見細(xì)胞凋亡的特異性標(biāo)志——凋亡小體形成。
　　 6．TUNEL法檢測(cè)結(jié)果顯示，各治療組與荷瘤對(duì)照組相比凋亡細(xì)胞明顯增多，凋亡指數(shù)增高，差異顯著，

7、尤以健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺組增多最為明顯。環(huán)磷酰胺組與健脾理氣方藥組之間凋亡指數(shù)無明顯差異，而健脾理氣方藥+環(huán)磷酰胺組與健脾理氣方藥組之間的凋亡指數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明健脾理氣方藥與環(huán)磷酰胺合用在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡方面具有協(xié)同作用。
　　 7．原位雜交法結(jié)果表明，與荷瘤對(duì)照組相比，各治療組端粒酶活性降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各治療組之間端粒酶活性無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 8．免疫組化法結(jié)果表明，各治療組的突變型p53、Bcl-

8、2和C-myc基因蛋白的陽性表達(dá)率均低于腫瘤對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各治療組之間上述三種基因蛋白的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1．健脾理氣方藥具有抑制Hca-F肝癌小鼠腫瘤細(xì)胞增殖的作用，且與環(huán)磷酰胺合用后抑瘤效果明顯增強(qiáng)。
　　 2．健脾理氣方藥具有增強(qiáng)Hca-F肝癌小鼠外周血淋巴細(xì)胞Mg2+-ATP酶以及G-6-P酶活性的作用，具有調(diào)節(jié)Hca-F肝癌小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD