氯化鋰對(duì)小鼠H-,22-肝癌細(xì)胞及荷肝癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制作用的研究.pdf

1、目的肝細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱肝癌)是最常見和惡性程度最高的腫瘤之一，位居全球惡性腫瘤發(fā)病率的第5位，在我國(guó)為惡性腫瘤死因第2位，對(duì)我國(guó)人民健康造成極大的危害。近年來的研究表明，鋰鹽具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、影響癌基因表達(dá)及誘導(dǎo)凋亡的作用。本課題通過體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究了氯化鋰(LiCl)對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞H22生長(zhǎng)增殖的影響，并探討其作用機(jī)制。方法體外實(shí)驗(yàn)，為觀察LiCl對(duì)H22肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響，用不同濃度的LiCI處理H22細(xì)胞36h后，用MTT法

2、檢測(cè)LiCI對(duì)H22細(xì)胞的增殖情況；通過Hoechst染色法，在熒光顯微鏡下觀察在LiCl作用下，H22細(xì)胞是否發(fā)生凋亡；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)LiCI是否能夠誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡；采用RT-PCR法檢測(cè)LiCI對(duì)H22細(xì)胞中p21、Bax、Bcl-2mRNA表達(dá)的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，建立小鼠H22肝癌細(xì)胞實(shí)體瘤模型，觀察氯化鋰對(duì)荷肝癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；從腫瘤重量、體積、組織病理學(xué)以及組織超微結(jié)構(gòu)來觀察LiCl對(duì)肝癌的抑制作用；采用RT-PC

3、R法檢測(cè)LiCl對(duì)肝癌組織中p21、Bax、Bcl-2mRNA表達(dá)的影響；采用Westernblot法檢測(cè)不同組別肝癌組織中p53、p2l、Bax蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果采用MTT法觀察LiCI對(duì)H22細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明LiCl對(duì)H22細(xì)胞的增殖具有一定的抑制作用，并且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；采用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀對(duì)不同濃度LiCl處理的H22細(xì)胞進(jìn)行觀察，從形態(tài)和生化兩個(gè)方面證實(shí)了LiCl可以誘導(dǎo)H22細(xì)胞產(chǎn)生凋亡；RT-PCR方法

4、檢測(cè)，結(jié)果表明不同濃度的LiCI處理H22細(xì)胞36小時(shí)后，細(xì)胞中的p21、BaxmRNA表達(dá)與對(duì)照組相比明顯升高，并呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系：而Bcl-2mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比無明顯變化。LiCl對(duì)荷肝癌小鼠腫瘤的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，其中氯化鋰處理組的中濃度組和高濃度組抑瘤率分別達(dá)到50．0％和60．7％，；組織病理學(xué)檢查表明LiCl處理組肝癌組織切片中可見細(xì)胞形態(tài)變小，胞核濃縮的程度嚴(yán)重，甚至破裂，大量細(xì)胞發(fā)生出血壞死；腫瘤組織電鏡下可

5、見凋亡細(xì)胞和凋亡小體；RT-PCR方法檢測(cè)，結(jié)果表明一定濃度的Licl可使肝癌組織中的p21、BaxmRNA表達(dá)升高，并可下調(diào)Bcl-2mRNA表達(dá)；Westernblot方法檢測(cè)，結(jié)果表明一定濃度的Licl可使肝癌組織中的p53、p2l、Bax蛋白表達(dá)升高。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示LiCI在體內(nèi)和體外均可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞增值起抑制作用，且抑制作用在一定范圍內(nèi)隨著作用濃度的增加而增強(qiáng)；其機(jī)制可能是通過p53依賴途徑誘導(dǎo)