突發(fā)公共衛(wèi)生事件中金黃色葡萄球菌腸毒素基因的快速檢測方法研究.pdf

1、目的:食物中毒事件時有發(fā)生,金黃色葡萄球菌(簡稱金葡菌)是引起食物中毒的常見致病菌.該菌產(chǎn)生的葡萄球菌腸毒素(SE)可引起中毒癥狀,造成嘔吐、腹瀉及休克等.從某種意義上講,對食物中毒病原的診斷,檢測葡萄球菌腸毒素比檢測金葡菌本身更為重要,而尋找快速、敏感、特異的腸毒素診斷方法是一項亟待解決的研究課題.為了適應(yīng)食物中毒這類突發(fā)事件,及時給臨床治療提供準確的病原學(xué)診斷,建立一種快速檢測腸毒素的方法成為當務(wù)之急,也是本次研究課題的目的.方法:

2、葡萄球菌腸毒素根據(jù)血清型分類可分成A、B、C、D、E、G、H、I、J型.本研究針對9型葡萄球菌腸毒素基因設(shè)計了特異性PCR引物,分別檢查各型腸毒素的基因表達情況.將金葡菌10倍稀釋成一系列濃度進行靈敏度實驗.應(yīng)用9對特異性引物分別對8種人類其他致病菌包括肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌、志賀氏菌、沙門氏菌、副溶血弧菌、霍亂弧菌進行PCR擴增,以金葡菌為陽性對照進行特異性實驗.另外,在實際應(yīng)用中,本研究嘗試直接將中毒食物樣品經(jīng)

3、均質(zhì)器粉碎混勻,取上層勻漿液提取DNA,進行金葡菌各型腸毒素基因的PCR擴增,同時采用美國國標方法即多參數(shù)免疫分析儀(Vidas)對葡萄球菌腸毒素進行測定.按照世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的K-B法對分1泌不同型腸毒素的金葡菌進行了藥敏實驗.結(jié)論:設(shè)計的9對引物成功的擴增了金葡菌產(chǎn)生的各型腸毒素的基因,具有很強的特異性;利用9對引物應(yīng)用PCR法成功地從食物中毒樣品中直接擴增出了腸毒素基因,證明該方法具有很高的靈敏度;該方法有可能成為食物中