幽門螺桿菌在胃上皮細胞及胃腺癌細胞增殖凋亡中的作用及機制研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　自1983年Marshall和Warren成功分離并培養(yǎng)了幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，Hp)以來，關于其與許多慢性胃疾病、癌前病變以及胃癌發(fā)生的相關性及其機制問題成為國內外研究的熱點。Hp既能導致胃上皮細胞的凋亡，同時刺激其代償性增殖，因此由Hp感染而導致的胃上皮細胞更新率（凋亡或增殖）的改變可能是胃癌發(fā)生的重要機制，然而Hp對胃上皮細胞以及不同胃癌細胞增殖凋亡情況的影響及具體機制尚不十

2、分清楚。本研究旨在通過構建胃上皮細胞GES-1、人胃腺癌細胞株SGC-7901、人低分化胃腺癌細胞系MGC-803、人胃癌細胞株BGC-823Hp體外感染模型，觀察HpⅠ型菌株(CagA+，VacA+)對上述細胞形態(tài)、增殖、以及細胞凋亡的影響，并探討其可能機制，研究Hp感染在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為胃癌的臨床診斷和防治提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　將胃上皮細胞GES-1、人胃腺癌細胞株SGC-7901、人低分化胃腺癌細胞

3、系MGC-803、人胃癌細胞株BGC-823分別與不同MOI(multiplicity of infection)的HpⅠ型菌株(CagA+，VacA+)培養(yǎng)24h、48h。進行以下實驗分析:
　　(1)倒置顯微鏡下觀察上述四種細胞在不同MOI、不同培養(yǎng)時間的細胞形態(tài)學變化;
　　(2)MTT法檢測四種細胞在不同MOI、不同培養(yǎng)時間的細胞生長情況，分析Hp對四種細胞增殖情況的影響;
　　(3)流式細胞儀分析上述四種細胞

4、細胞凋亡指數(shù)(AI)、增殖指數(shù)(PI)、細胞周期;
　　(4)Western-blot方法檢測凋亡相關蛋白Caspase-3，Caspase-9及增殖相關蛋白P53，P21、E2F-1表達情況。
　　結果:
　　(1)倒置顯微鏡下觀察四種細胞與Hp共同培育后細胞正常形態(tài)發(fā)生改變，且隨著細菌數(shù)目增加，細胞形態(tài)失常更加明顯。
　　(2)MTT細胞增殖活性檢測顯示四種細胞株經Hp處理后，細胞增殖活性受到不同程度抑制，其

5、中正常胃上皮細胞株GES-1抑制明顯，且隨時間增加、細菌數(shù)目增多抑制效應明顯，而SGC-7901、MGC-803、 BGC-823三種細胞系抑制率隨Hp數(shù)目、培育時間變化呈輕微改變。
　　(3)流式細胞學(FCM)檢測在Hp處理后四種細胞系凋亡指數(shù)升高，增殖指數(shù)升高，呈不同比例的S期細胞增多，G1期細胞減少現(xiàn)象。
　　(4)Western-blot檢測顯示經Hp處理后，四種細胞系Caspase-3，Caspase-9表達量不