幽門螺桿菌重組VacA-CtxB蛋白的原核表達(dá)及免疫原性研究.pdf

1、目的：構(gòu)建H.pylori細(xì)胞空泡毒素(VacA)毒性片段與霍亂毒素B亞單位(CtxB)融合基因的原核表達(dá)載體，并誘導(dǎo)表達(dá)，以獲得重組蛋白，鑒定其免疫原性，為制備防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法： 1)用PCR擴(kuò)增出vacA目的基因片段，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pQE30-vacA。 2)用PCR擴(kuò)增出ctxB目的基因片段，克隆至pQE30-vacA質(zhì)粒vacA的基因上游，構(gòu)建含雙基因的表達(dá)質(zhì)粒pQE-

2、vctB。 3)pQE-vctB轉(zhuǎn)化E.coli DH5α，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白VCTB，Westernblotting分析抗原性，鎳離子柱純化。 4)重組蛋白VCTB口服免疫小鼠，ELISA檢測(cè)小鼠血清特異性IgG、小腸沖洗液IgA，以鑒定其免疫原性。 結(jié)果：經(jīng)測(cè)序vctB融合基因由1092bp組成，為編碼364個(gè)氨基酸殘基的多肽。重組蛋白VCTB經(jīng)SDS-PAGE分析相對(duì)分子量(Mr)約為40KD，表達(dá)量

3、占全菌的20％以上，親和層析后可獲得純度為92％以上的蛋白。Western blotting分析顯示能分別與VacA抗血清和CT抗血清反應(yīng)。ELISA檢測(cè)顯示，免疫小鼠的血清特異性抗體IgG，腸粘液IgA顯著高于VacA對(duì)照組(P<0.01)。 結(jié)論：vacA和ctxB融合基因原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功，轉(zhuǎn)化E.coliDH5α表達(dá)菌獲得了重組蛋白VCTB，表達(dá)量較高，純度較高，有良好的抗原性和免疫原性，口服免疫小鼠可明顯提高其免疫效