胸膜肺炎放線桿菌apxⅠA基因的克隆、表達(dá)及免疫原性研究.pdf

1、為研究ApxⅠ毒素的免疫活性，本試驗(yàn)參照胸膜肺炎放線桿菌血清10型apxⅠA基因核酸序列(D16582)設(shè)計(jì)一對引物，利用PCR自該菌株基因組DNA中擴(kuò)增出3158bp的apxⅠA基因片段，經(jīng)克隆和序列測定后轉(zhuǎn)入原核表達(dá)載體pET-32a中，通過轉(zhuǎn)化BL21(DE3)并在IPTG誘導(dǎo)下進(jìn)行原核表達(dá)，SDS-PAGE和Westernblotting鑒定結(jié)果顯示表達(dá)蛋白大小約120kDa，且表達(dá)蛋白可與該菌株免疫兔血清發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。將apx

2、ⅠA表達(dá)蛋白與apxⅠAN和apxⅠAC表達(dá)的蛋白同時(shí)純化，并從APP血清10型菌體中提取天然ApxⅠ毒素，將四種蛋白分別和等量佐劑乳化后免疫小鼠，其間用間接ELISA方法檢測抗體效價(jià)。在免疫三次后，分別用5×LD50的APP血清1型和APP血清10型野生菌株對小鼠進(jìn)行攻毒，結(jié)果顯示apxⅠA表達(dá)蛋白具有與提取的天然ApxⅠ毒素同樣的保護(hù)力，雖然apxⅠAN表達(dá)蛋白免疫保護(hù)力低于全蛋白，但顯著高于apxⅠAC表達(dá)蛋白，提示apxⅠA-N