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1、為研究ApxⅠ毒素的免疫活性，本試驗參照胸膜肺炎放線桿菌血清10型apxⅠA基因核酸序列(D16582)設(shè)計一對引物，利用PCR自該菌株基因組DNA中擴增出3158bp的apxⅠA基因片段，經(jīng)克隆和序列測定后轉(zhuǎn)入原核表達載體pET-32a中，通過轉(zhuǎn)化BL21(DE3)并在IPTG誘導下進行原核表達，SDS-PAGE和Westernblotting鑒定結(jié)果顯示表達蛋白大小約120kDa，且表達蛋白可與該菌株免疫兔血清發(fā)生結(jié)合反應。將apx
2、ⅠA表達蛋白與apxⅠAN和apxⅠAC表達的蛋白同時純化，并從APP血清10型菌體中提取天然ApxⅠ毒素，將四種蛋白分別和等量佐劑乳化后免疫小鼠，其間用間接ELISA方法檢測抗體效價。在免疫三次后，分別用5×LD50的APP血清1型和APP血清10型野生菌株對小鼠進行攻毒，結(jié)果顯示apxⅠA表達蛋白具有與提取的天然ApxⅠ毒素同樣的保護力，雖然apxⅠAN表達蛋白免疫保護力低于全蛋白，但顯著高于apxⅠAC表達蛋白，提示apxⅠA-N
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