Nogo-66蛋白的免疫原性及對慢性高眼壓SD大鼠RGCs免疫保護的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文Nogo66蛋白的免疫原性及對慢性高眼壓SD大鼠RGCs免疫保護的實驗研究姓名：岳紅云申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：賀翔鴿20080501第三軍醫(yī)大學博士學位論文PredictionServer抗原表位分析軟件進行我們前期重組的Nogo一66蛋白抗原表位分析，證明Nogo一66的氨基酸序列具有明確的T淋巴細胞抗原表位。在此基礎(chǔ)上做了以下研究：一、Nogo66蛋白對培養(yǎng)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞活化研究使用不同濃度

2、的Nogo一66蛋白與視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)，檢測小膠質(zhì)細胞共刺激分子Ox40L表達情況及小膠質(zhì)細胞形態(tài)變化與Nogo66蛋白濃度效應(yīng)的關(guān)系；二、Nogo一66蛋白對SD大鼠免疫功能的影響使用Nogo一66蛋白接種sD大鼠，分析接種后SD大鼠的脾淋巴細胞的細胞周期，及特異性血清抗體濃度改變及其時間一效應(yīng)關(guān)系。觀察Nogo66蛋白不同接種濃度SD大鼠是否出現(xiàn)EAE及EAu改變，以及實質(zhì)性臟器的組織結(jié)構(gòu)改變。三、慢性高眼壓對SD大鼠視網(wǎng)膜小

3、膠質(zhì)細胞免疫功能研究建立SD大鼠慢性高眼壓模型，免疫組織化學方法觀察高眼壓過程中視網(wǎng)膜專職抗原提呈細胞一視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞的功能特征。四、Nogo66蛋白對慢性高眼壓SD大鼠視網(wǎng)膜RGCs保護作用的研究按照皮下接種Nogo一66蛋白后時間效應(yīng)關(guān)系，進行眼玻璃體內(nèi)追加免疫，檢測慢性高眼壓SD大鼠的視網(wǎng)膜免疫特征改變。并通過四甲基葡聚糖羅丹明標記計數(shù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞及視覺誘發(fā)電位檢測視覺功能，分析判斷Nogo一66蛋白的對慢性高眼壓SD大鼠視

4、網(wǎng)膜的免疫保護作用。主要結(jié)果及結(jié)論如下：一、Nogo66蛋白對視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞具有免疫原性經(jīng)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)證明；Nogo一66蛋白能夠激活視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞使體積增大，當Nogo66蛋白濃度至2000ng／ml出現(xiàn)巨噬細胞樣改變。并刺激視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞表達表面黏附分子0x40L，Nogo一66蛋白質(zhì)對視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞具有的免疫原性。二、Nogo一66蛋白能夠促進SD大鼠特異性免疫反應(yīng)Nogo一66蛋白接種sD大鼠后，采用流式細胞術(shù)分

5、析SD大鼠脾淋巴細胞的細胞周期，結(jié)果顯示：Nogo一66蛋白能夠刺激大鼠產(chǎn)生致敏T淋巴細胞，提高血清Nogo66蛋白特異性IgG抗體濃度。另外，在有效濃度刺激下，正常SD大鼠大腦、小腦、脊髓及各實質(zhì)臟器均未發(fā)生實驗性自身免疫性腦脊髓炎(xperimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)特征性改變、視網(wǎng)膜無實驗性變應(yīng)性色素層炎(experimentalallergicuveitis，EAU)發(fā)生。三、慢