IHNV糖蛋白的截短表達(dá)及免疫原性檢測(cè).pdf

1、魚傳染性造血器官壞死病(Infectious Haematopoietic Necrosis of fish，IHN)是由傳染性造血器官壞死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus，IHNV)引起的一種鮭科魚類的常見急性病毒性傳染病，常造成魚苗或幼魚高達(dá)50％-100％的死亡率。
　　IHNV囊膜表面有一個(gè)糖蛋白(Glycoprotein，G)突起。G蛋白在參與細(xì)胞受體與病毒的識(shí)別和結(jié)合

2、等過程中起著非常重要的作用，并且與病毒的毒力相關(guān)。此外，G蛋白還是病毒的主要抗原，存在保護(hù)性抗原決定簇，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體。因此，G蛋白及其抗體的制備在IHNV診斷試劑的開發(fā)、G蛋白功能的研究及基因工程疫苗的研制中具有重要的作用。
　　我國現(xiàn)行IHNV毒株與歐美等國家的IHNV流行毒株基因型均有所不同，有可能會(huì)導(dǎo)致G蛋白免疫原性改變。因此，針對(duì)我國IHNV毒株的免疫學(xué)檢測(cè)方法的建立極為必要。而目前，以全長(zhǎng)G蛋白為抗原制

3、備的多抗與病毒性出血性敗血癥病毒(Viral haemorrhagic septicemia virus，VHSV)存在交叉反應(yīng)。針對(duì)上述問題，本研究在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上，對(duì)我國現(xiàn)行IHNV毒株G蛋白進(jìn)行截短表達(dá)和抗血清的制備，旨在建立我國現(xiàn)行IHNV的免疫學(xué)檢測(cè)方法。
　　為了深入研究G蛋白的免疫原性，本文通過相關(guān)軟件分析了G蛋白的跨膜區(qū)、抗原性和疏水性后，將G蛋白截短表達(dá)。聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamideg

4、elelectrophoresis，PAGE)的結(jié)果顯示，經(jīng)過截短后的糖蛋白Gs大小為40kDa，將截短后的糖蛋白進(jìn)行純化，用高效液相色譜法(High Performance LiquidChromatography，HPLC)檢測(cè)其純度達(dá)到90％。使用純化后的糖蛋白Gs制備兔抗血清，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(ELISA)間接免疫熒光結(jié)果分析，制備的兔抗血清與IHNV-Sn分離株及參考毒株的反應(yīng)均呈熒光紅色，說明兔抗血清與IHNV能發(fā)生特異性