華支睪吸蟲六個未知基因的識別及PGK1和PGK2的生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:通過篩選華支睪吸蟲成蟲cDNA質(zhì)粒文庫，發(fā)現(xiàn)并識別未知的全長基因。在此基礎(chǔ)上，對新發(fā)現(xiàn)的華支睪吸蟲磷酸甘油酸激酶同工酶基因進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化分析，并研究其生物學(xué)活性：包括免疫原性、免疫反應(yīng)性，組織分布，酶活性及對肝癌生長的抑制作用。同時研究這兩個同工酶在蟲體中的差異表達(dá)和進(jìn)化分析，以探討這兩個同工酶在華支睪吸蟲中的作用和可能的應(yīng)用價值。 結(jié)論:1.通過篩選華支睪吸蟲成蟲cDNA文庫，獲得6個具有完整開放閱讀框的全長cDN

2、A序列，經(jīng)生物信息學(xué)分析初步鑒定為華支睪吸蟲乙醛脫氫酶基因(CsALDH)，半胱氨酸蛋白酶基因(CsCP)，3-磷酸甘油醛脫氫酶1基因(CsGAPDH1)，3-磷酸甘油醛脫氫酶2基因(CsGAPDH2)，3-磷酸甘油酸激酶1基因(CsPGK1)和3-磷酸甘油酸激酶2基因(CsPGK2)，同時對它們的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了鑒定和預(yù)測。2.成功構(gòu)建了六個原核表達(dá)載，成功表達(dá)出CsPGK1、CsPGK2、CsCP、CsALDH、CsGAPDH1和C

3、sGAPDH2融合蛋白。并成功純化出CsPGK1和CsPGK2蛋白。3.純化的CsPGK1和CsPGK2蛋白均具有磷酸甘油酸激酶的活性，同時它們還具有抑制肝癌腫瘤及腹水的增長，具有潛在的藥用價值。4.CsPGK1和CsPGK2在蟲體分布廣泛，其中以PGK1表達(dá)為主，這也證明PGK是華支睪吸蟲的重要物質(zhì)，糖酵解是華支睪吸蟲獲得能量的重要方式。它們能被病人血清所識別，是潛在的抗原診斷分子。5.PGK序列高度保守，可以用來進(jìn)行種系發(fā)生的研究和