華支睪吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文華支睪吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究專業(yè)：姓名：導(dǎo)師：病原生物學(xué)楊光余新炳教授教授教授教授教授教授教授教授教授2005年4月25日廣州本項目獲廣東省自然科學(xué)團隊等基金資助華支墨吸蟲AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文乳酸脫氫酶廣泛分布在細菌、植物和動物之中。在脊椎動物中，乳酸脫氫酶是由四個亞單位組成的四聚體，其亞單位有3個獨立的基因座LDH—A。一B，一e基因所編碼。乳酸脫氫酶(

2、LDH)是糖代謝中的一個非常重要的酶，在NADH輔酶I存在的條件下能催化丙酮酸和乳酸之削相互轉(zhuǎn)化。乳酸脫氫酶的作用還有，在哺乳動物的過氧化物酶體中，LDH與B氧化系統(tǒng)相偶聯(lián)并與NADH的再氧化有關(guān)。糖代謝酶被認(rèn)為是吸蟲生命能夠存活的關(guān)鍵分子，已經(jīng)被作為靶標(biāo)進行疫苗研究的重要分子。從應(yīng)用上講，乳酸脫氫酶在寄生蟲感染和一些疾病的診斷中有一定的意義。通過顯微鏡檢和臨床癥狀確診的病人或者復(fù)發(fā)感染瘧原蟲者，從其血液中可檢測到LDH的活性。在無脊椎

3、動物中，乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間相互轉(zhuǎn)化的特性研究還不深入。研究目的確定華支睪吸蟲AK3的cDNA和其編碼蛋白的分子特征包括：酶活性、最適pH、最適溫度、動力學(xué)參數(shù)、底物特異性、酶活性的抑制劑和其二級結(jié)構(gòu)，了解華支睪吸蟲核苷酸代謝方面的特征。確定華支睪吸蟲LDH的cDNA和其編碼蛋白的分子特征、酶活性、最適pH、最適溫度、動力學(xué)參數(shù)、底物特異性、會屬離子對其活性的影響、酶抑制劑、二級結(jié)構(gòu)、及蛋白結(jié)晶條件，了解華支睪吸蟲糖代謝方面的

4、特征。研究方法從華支睪成蟲的eDNA文庫中通過大規(guī)模測序克隆新基因，利用NCBl(http：／／wwwnlmnihgov／BLAST)網(wǎng)站的BLASTN，BLASTP去除序列中的載體部分并在DNA和氨基酸水平上進行同源性分析。開放讀碼框采用ORFfinder(http：／／wwwnlmnihgov／gorf／gorfhtml)程序預(yù)測。尋找完整閱讀框的起始密碼子和終止密碼子。蛋白分析用蛋白組學(xué)序列分析工具采用SWISS—MODELRep