玉米大斑病菌StMKK1基因的結構分析及功能研究.pdf

1、分類號：豎蘭5：!三!密級：公玨單位代碼：!QQ逝學號：2Q!圣2Q墨QQ壘2玉米大斑病菌StMKKl基因的結構分析及功能研究StructuralAnalysisandFunctionStudyofStMKKlGeneinSetosphaeriaturcica學位申請人：薛韶娜指導教師：谷守芹教授董金皋教授學科專業(yè)：植物學學位類別：理學碩士授予單位：河北農業(yè)大學答辯日期：二。一六年五月三十日摘要lIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

2、IllllIIlY3100909本課題組在前期研究中利用生物信息學技術對玉米大斑病菌基因組數據庫分析發(fā)現，在玉米大斑病菌中存在CWIMAPK級聯途徑，但其功能尚不清晰。本研究擬在此基礎上，利用生物信息學技術分析該級聯途徑的關鍵基因StMKKI(MAPKK)的結構特征，并利用靶基因敲除技術明確該基因的功能。該研究不僅可明確玉米大斑病菌StMKKI基因的功能，也可為闡明CWI—MAPK級聯途徑的功能奠定基礎。主要研究結果如下：1采用DNAs

3、tar、DNAMAN本地軟件和NCBI網站在線軟件BLAST分析了StMKKl基因的結構，發(fā)現該基因具有MAPKK類基因的STKc保守結構域；聚類分析發(fā)現，StMKKl基因與釀酒酵母中的MKKl基因有具有較近的親緣關系，表明玉米大斑病菌StMKKJ屬于MKKl1ike基因。2利用聚乙二醇(PEG)介導的原生質體轉化方法創(chuàng)制StMKKl基因敲除突變體，通過潮霉素B抗性篩選、特異引物PCR及RTPCR驗證，篩選得到了2株StMKKl基因敲除

4、突變體，分別命名為z3StMKK，一J『和厶StMKKl2。3與野生型菌株相比較，StMKKl基因敲除突變體生長速度明顯下降，不產生分生孢子，表明StMKKl基因參與調控病菌菌落的生長及分生孢子發(fā)育。4與野生型相比，StMKKl基因敲除突變體對細胞壁合成抑制劑剛果紅、CFW、SDS的敏感性降低，且突變體的細胞壁疏水性降低，表明StMKKl基因影響病菌的細胞壁發(fā)育。5在鹽脅迫條件下，StMKKl基因敲除突變體菌落生長抑制率與野生型菌株沒有