椎間盤纖維環(huán)交感神經分布特點與青少年特發(fā)性脊柱側凸發(fā)病的相關研究.pdf

1、青少年特發(fā)性脊柱側凸(Adolescent Idiopathic Scoliosis,AIS)是一種常見的復雜的脊柱三維畸形,其病因非常復雜,國內外學者在基因遺傳、中樞神經系統(tǒng)、脊柱的骨骼肌肉系統(tǒng)、神經內分泌系統(tǒng)等諸多方面進行了深入研究,但仍然沒有找到AIS的確切病因。椎間盤是脊柱的重要組成部分,在脊柱的生長發(fā)育、三維平衡中有不容忽視的作用,因此椎間盤一直是AIS病因學研究中廣大學者關注的熱點。以前人們對椎間盤的研究主要集中在椎間盤的營

2、養(yǎng)代謝、膠原纖維的類型等方面,仍然沒有明確AIS的真正病因,但研究發(fā)現(xiàn)椎間盤周圍分布有大量的神經纖維,椎間盤周圍的神經主要來源于交感干及脊神經的分支,大部分神經纖維應該為交感神經纖維,但以前沒有對椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經分布進行研究的報道。本課題組設想AIS患者椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布如果和正常人不同則可能和AIS相關,但難以明確兩者之間的因果關系,因此本課題組設計一系列實驗來研究椎間盤纖維環(huán)交感神經的分布與AIS發(fā)病的相關性,

3、探討AIS的發(fā)病原因,為AIS的早期臨床診治提供理論依據(jù)。 目的： 1、建立符合本課題要求的山羊脊柱側凸模型； 2、探討脊柱逐漸形成側凸的這個形態(tài)學改變是否會引起椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布發(fā)生改變； 3、探討椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布與AIS發(fā)病的相關性。 方法： 1、第一部分以13只未成年山羊為研究對象,顯露山羊胸腰段脊柱后結構,通過椎弓根螺釘系統(tǒng)跨節(jié)段原位固定山羊一側椎弓根,手術即刻不

4、施加外力、利用未成年山羊的生長潛能自然生長形成脊柱側凸； 2、第二部分以12只未成年山羊為研究對象,將12只山羊分為NF200常規(guī)熒光組織化學染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為左側前方、左側后方、右側前方、右側后方四個區(qū),取山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)標本,將其中6只山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,以明確椎間盤不同

5、部位纖維環(huán)上是否存在神經纖維分布及其特點；將另外6只山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運用SRS 9.1.3版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,最終明確正常山羊椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經纖維分布特點。 3、第三部分以12只側凸山羊模型為研究對象,將12只側凸山羊分為NF200常規(guī)熒光組織化學染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為凸側前方、

6、凸側后方、凹側前方、凹側后方四個區(qū),取側凸山羊頂椎區(qū)椎間盤(T13/L1)纖維環(huán)標本,將其中6只側凸山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,以明確側凸山羊項椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經纖維分布及其特點；將另外6只側凸山羊T13/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像

7、分析軟件進行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運用SRS 9.1.3版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,最終明確側凸山羊頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經纖維分布特點。 4、第四部分以12具正常青少年尸體標本的T12/L1椎間盤纖維環(huán)為研究對象,將12個椎間盤標本分為NF200常規(guī)熒光組織化學染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為左側前方、左側后方、右側前方、右側后方四個區(qū),將其中6個正常人T12/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、NF200常規(guī)熒

8、光組織化學染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,以明確正常人椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經纖維分布及其特點；將另外6個正常人T12/L1椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運用SRS 9.1.3版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,最終明確正常人椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經纖維分布特點。 5、第五部分以12例AIS患者頂椎

9、區(qū)椎間盤纖維環(huán)為研究對象,將12例AIS患者分為NF200常規(guī)熒光組織化學染色組和乙醛酸染色組,將椎間盤分為凸側前方、凸側后方、凹側前方、凹側后方四個區(qū),將其中6例AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行冰凍切片、NF200常規(guī)熒光組織化學染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,以明確AIS患者頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)上是否存在神經纖維分布及其特點；將另外6例AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)的各分區(qū)標本進行

10、冰凍切片、乙醛酸染色,使用熒光顯微鏡進行觀察、攝片,并通過圖像分析軟件進行圖像分析,整理數(shù)據(jù)運用SRS9.1.3版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,最終明確AIS患者頂椎區(qū)椎間盤不同部位纖維環(huán)的交感神經纖維分布特點。 結果： 1、第一部分：1只山羊因麻醉藥物過量死亡,另外12只山羊建模成功。術后即刻Cobb角為0°,術后2個月Cobb角為16.34±1.07°(14.5°～17.8°),術后3個月Cobb角為21.06±1.09°

11、(19.2°～22.4°)。隨著時間的延長,側凸Cobb角不斷增大。術后2個月和術后3個月Cobb角進行t檢驗,P<0.0001。 2、第二部分:NF200常規(guī)熒光組織化學染色組,將所測得正常山羊椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,左側前方和右側前方、左側后方和右側后方、左側前方和左側后方、右側前方和右側后方、左側和右側椎間盤纖維環(huán)的神經分布無顯著差異(P>0.05);乙醛酸染色組,將所測得正常山羊椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進

12、行t檢驗,左側前方和右側前方、左側后方和右側后方、左側前方和左側后方、右側前方和右側后方、左側和右側椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布無顯著差異(P>0.05)。 3、第三部分:NF200常規(guī)熒光組織化學染色組,將所測得側凸山羊頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,凸側前方和凹側前方、凸側后方和凹側后方、凸側前方和凸側后方、凹側前方和凹側后方、凸側和凹側椎間盤纖維環(huán)的神經分布無顯著差異(P>0.05);乙醛酸染色組,將所測得側凸山

13、羊頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,凸側前方和凹側前方、凸側后方和凹側后方、凸側前方和凸側后方、凹側前方和凹側后方、凸側和凹側椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布無顯著差異(P>0.05)。 4、第四部分:NF200常規(guī)熒光組織化學染色組,將所測得正常人椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,左側前方和右側前方、左側后方和右側后方、左側前方和左側后方、右側前方和右側后方、左側和右側椎間盤纖維環(huán)的神經分布無顯著差異(P>0.05);

14、乙醛酸染色組,將所測得正常人椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,左側前方和右側前方、左側后方和右側后方、左側前方和左側后方、右側前方和右側后方、左側和右側椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布無顯著差異(P>0.05)。 5、第五部分:NF200常規(guī)熒光組織化學染色組,將所測得AIS患者頂椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,凸側前方和凸側后方、凹側前方和凹側后方纖維環(huán)神經分布無顯著差異(P>0.05),凸側前方和凹側前方、凸側后方和

15、凹側后方、凸側和凹側椎間盤纖維環(huán)的神經分布有顯著差異(P<0.05);乙醛酸染色組,將所測得AIS患者項椎區(qū)椎間盤纖維環(huán)各區(qū)切片熒光值進行t檢驗,凸側前方和凸側后方、凹側前方和凹側后方椎間盤纖維環(huán)神經分布無顯著差異(P>0.05),凸側前方和凹側前方、凸側后方和凹側后方、凸側和凹側椎間盤纖維環(huán)的交感神經分布有顯著差異(P<0.05)。 結論： 1、單側椎弓根螺釘原位固定可以成功的建立山羊脊柱側凸模型； 2、脊柱在