川芎嗪聯(lián)合丹參延緩大鼠慢性移植腎腎病的進程.pdf

1、目的：探索川芎嗪聯(lián)合丹參對大鼠慢性移植腎腎?。–hroni callograft nephropathy，CAN）的治療作用，揭示其與CAN之間的關(guān)系，進一步發(fā)現(xiàn)其延緩大鼠CAN的作用機制，為臨床上延長移植腎的存活時間提供新的治療途徑。 方法： 1.大鼠模型的建立：F344近交系大鼠和Lewis近交系大鼠作為供、受體，取供體的左腎作為供腎，在裸眼直視下行供體下腔靜脈與受體腎靜脈的端端吻合，供體腹主動脈與受體腹主動脈行端側(cè)

2、吻合，進行原位異體腎移植。 2.將125只腎移植大鼠分成5組，每組25只，分別為A組環(huán)孢素組，B組川芎嗪聯(lián)合環(huán)胞素組，C組丹參聯(lián)合環(huán)胞素組，D組川芎嗪、丹參聯(lián)合環(huán)胞素組，E組為空白組。給藥途徑：環(huán)孢素灌胃，丹參、川芎嗪腹腔注射。手術(shù)后連續(xù)用藥10天。期間觀察大鼠的生活狀態(tài)，分別于移植術(shù)后2，4，6，8，12周處死大鼠，通過檢測HE、PAS以及Masson染色觀察各組大鼠移植腎組織病理學(xué)變化。 3.采用免疫組織化學(xué)和實時熒

3、光定量PCR檢測TGF-β1的蛋白和mRNA在移植腎的表達及其定位情況，揭示川芎嗪聯(lián)合丹參延緩大鼠CAN的作用及機制。 結(jié)果 1.大鼠CAN模型的建立通過手術(shù)訓(xùn)練技術(shù)成熟后共進行140例手術(shù)，手術(shù)成功率96.43％；手術(shù)總時間約150min，其中取腎約20min，進行移植術(shù)約70min。通過對移植腎病理學(xué)動態(tài)檢查，移植腎術(shù)后4周開始出現(xiàn)CAN的病理改變，12周可見典型慢性排斥反應(yīng)病變。從而建立大鼠CAN模型。 2

4、.腎移植術(shù)后移植腎組織病理學(xué)改變腎移植術(shù)后E組腎移植大鼠存活均未超過2周；A組4周最早出現(xiàn)CAN病理改變，并隨病程進展移植腎病變逐漸加重，12周可見典型的CAN病變；而B、C組移植腎出現(xiàn)的時間較A組出現(xiàn)晚，D組出現(xiàn)時間最晚，且病變相對較輕。A組與其它各組相比移植腎病理變化Banff總分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與D組間的差異更顯著（P<0.01）；B、C組之間Banff總分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 3.免疫組化

5、及實時熒光定量PCR檢測TGF-β1的蛋白和mRNA在移植腎的表達情況移植術(shù)后4周TGF-β1陽性細胞數(shù)開始增多，其中以A組增高最明顯，B、C組次之，D組最低；隨著移植術(shù)后時間的推移，各組TGF-β1的表達進一步增強，12周時以A組表達增強明顯，D組最低。各組間進行統(tǒng)計學(xué)分析，A組與其余各組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中與D組間的差異更顯著（P<0.01）；B、C組之間相比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 通過對移植術(shù)

6、后大鼠移植腎各組各時相實時熒光定量PCR檢測TGF-β1mRNA的表達發(fā)現(xiàn)，A組TGF-β1mRNA的表達較其余各組明顯增高（P<0.05），與D組相比差異具有顯著性（P<0.01）；B組和C組相比，TGF-β1mRNA表達的相對比值數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論： 1.F344大鼠和Lewis大鼠作為供、受體進行原位異體腎移植，該方法手術(shù)操作簡單、直觀，簡化了顯微外科技術(shù)的設(shè)備要求，建立了大鼠原位異體腎移植模型