肌肉特異性表達(dá)MSTN siRNA與hFAD3在牛NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究.pdf

1、利用基因編輯技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)多基因調(diào)控并培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物新品種。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)，將肌肉特異性雙向共表達(dá)打靶載體5arm-shRNA-MRF4-MRF4-hFAD3-3arm(MSTN siRNA-hFAD3)定點(diǎn)整合入已證明的安全整合位點(diǎn)NCAPG-LCORL位點(diǎn)。研究MSTN siRNA-hFAD3表達(dá)對肌肉和脂肪酸相關(guān)基因的表達(dá)及n3多不飽和脂肪酸含量的影響，以期達(dá)到既促進(jìn)肌肉發(fā)育，同時(shí)增加肌肉中n-3多不飽和脂肪酸

2、，有效改善肉質(zhì)、提高肉量的目的。結(jié)果表明:(1)CRISPR/Cas9成功介導(dǎo)MSTN siRNA-hFAD3肌肉特異性雙向共表達(dá)載體在NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合入牛細(xì)胞基因組。(2)MSTN siRNA-hFAD3基因的表達(dá)在細(xì)胞水平顯示一定的肌肉特異性。(3)在定點(diǎn)整合的牛胎兒成纖維細(xì)胞及肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中，脂肪相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果顯示，脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動(dòng);肌肉發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)量均上調(diào);n6/n3比值均下降