雞大腸埃希氏菌iss基因與其致病力相關(guān)性的研究.pdf

1、大腸埃希氏菌（又名大腸桿菌）是自然環(huán)境中的常在菌，亦是溫血?jiǎng)游锵老露蔚某Ｗ【?，屬革蘭氏陰性中等大小的桿菌。研究表明，某些血清型的大腸桿菌為致病菌，某些血清型的大腸桿菌不致病，是動(dòng)物腸道的益生菌，而另一些大腸桿菌為條件致病菌，在一般情況下不致病，但在飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、動(dòng)物應(yīng)激、免疫力低下等情況下會(huì)造成發(fā)病。
　　有研究表明，大腸桿菌iss基因(increased serum resistance gene)的存在與否是判定大腸

2、桿菌致病性的重要手段之一。但亦有實(shí)驗(yàn)表明，大腸桿菌iss基因幾乎存在于所有大腸桿菌中，因此，深入研究大腸桿菌iss基因與其致病力的關(guān)系對(duì)科學(xué)防治本病具有重要的指導(dǎo)意義。
　　本研究對(duì)72株雞源大腸桿菌iss基因分別通過外套PCR、內(nèi)套PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明，利用外套PCR和內(nèi)套PCR檢測(cè)到69株菌具有iss基因，3株未檢測(cè)出iss基因，但實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)該3株菌均有iss基因的存在，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，

3、iss基因在大腸桿菌中普遍存在，但其轉(zhuǎn)錄水平的高低因不同的菌株有所差異。
　　將69株大腸桿菌iss基因序列進(jìn)行測(cè)序，與其他19株大腸桿菌序列一起進(jìn)行比對(duì)，共有16種不同的核苷酸序列，10種氨基酸序列，分別命名為type1-16和form1-10。經(jīng)過比對(duì)發(fā)現(xiàn)，不同序列之間的差異很小，突變的位置較為固定，但多數(shù)氨基酸序列并未發(fā)生改變，表明該基因保守性很高。進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示，16種核苷酸序列的進(jìn)化樹分為2個(gè)主干，其中type15序

4、列菌株和type16序列菌株位于同一分支，type1-14序列菌株位于同一大分支。氨基酸序列分析結(jié)果顯示，進(jìn)化樹主要分為2個(gè)大分支，其中form3、5序列菌株位于同一分支，其他序列菌株位于另一分支。
　　隨機(jī)選取30株大腸桿菌分別接種雛雞進(jìn)行了致病性試驗(yàn)，并進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)30株大腸桿菌iss基因的轉(zhuǎn)錄水平，檢測(cè)結(jié)果顯示，菌株相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)與其毒力成正相關(guān)。
　　分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)、毒力及血清抗性三者兩

5、兩之間存在正相關(guān)關(guān)系，相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)和雛雞致死試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.769，p=0.000＜0.01，極顯著正相關(guān);相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.662，p=0.000＜0.01，極顯著正相關(guān);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與雛雞致死結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.456，p=0.011＜0.05，顯著正相關(guān)。這說明iss基因的轉(zhuǎn)錄水平越高，大腸桿菌對(duì)于血清的抵抗能力越強(qiáng)，致病力越強(qiáng)。
　　本研究結(jié)果顯示，iss基因在大腸桿菌中是