尿路致病性大腸埃希菌與腸道大腸埃希菌的同源性分析及其粘附素的流行調(diào)查.pdf

1、目的:
　　粘附因子被認(rèn)為是尿路致病性大腸埃希菌(Uropathogenic Escherichia coli，UPEC)最重要的毒力因子，粘附因子可以使其在泌尿系統(tǒng)各器官上皮細(xì)胞發(fā)生粘附、定植甚至侵入，導(dǎo)致泌尿系感染的反復(fù)發(fā)作。本研究以UPEC臨床分離株為研究對(duì)象，對(duì)同一患者的大腸埃希菌（Escherichia coli,E.coli）的尿便分離株的同源性進(jìn)行分析，分析同源的E.coli攜帶的fimH序列，明確其與相應(yīng)的氨基酸序

2、列變化情況;對(duì)UPEC粘附因子相關(guān)基因攜帶率進(jìn)行調(diào)查，并比較其之間差異，從基因水平初步探討粘附因子與泌尿系感染之間的相關(guān)性。
　　材料與方法:
　　1、收集本院2009-2012年臨床診斷為泌尿系感染的門診和住院患者清潔中段尿培養(yǎng)分離的大腸埃希菌，以及2012年本院門診泌尿系感染患者的尿便來源的大腸埃希菌。
　　2、采用K-B紙片擴(kuò)散法測(cè)定大腸埃希菌（尿和便標(biāo)本分離的所有菌株）對(duì)三類五種抗菌藥物（氨芐西林、環(huán)丙沙星、頭

3、孢噻肟、頭孢哌酮、慶大霉素）的敏感性。根據(jù)大腸埃希菌藥敏表型對(duì)菌株進(jìn)行初步分型。
　　3、使用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)同一患者尿便來源菌株的同源性進(jìn)行分析。
　　4、PCR方法擴(kuò)增大腸埃希菌粘附因子相關(guān)基因，對(duì)同一患者尿便來源fimH陽性菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，并將其序列翻譯成相應(yīng)的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)。
　　結(jié)果:
　　1、共收集89株UPEC，70株來自反復(fù)發(fā)作性尿路感染患者，19株來自急

4、性單純性膀胱炎患者。9名門診泌尿系感染患者首日就診時(shí)的尿便標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)分離的E.coli。
　　2、9例患者中5例患者各自尿便分離的E.coli存在相同的藥敏表現(xiàn)類型，其余4例尿便分離E.coli無藥敏表型一致者。
　　3、同一患者尿便分離的E.coli藥敏表型一致的菌株在PFGE圖譜上具有相同的條帶數(shù)，且相應(yīng)條帶大小相同，為同一克隆株。而同一患者尿便分離的E.coli藥敏表型不一致者，其不一致的條帶數(shù)大于7，菌株之間無

5、相關(guān)性。
　　4、序列分析結(jié)果顯示，同一患者PFGE分型相同的尿便來源E.coli的fimH基因序列對(duì)比具有高度同源性(＞99.9％)，而同一患者PFGE分型不同的尿便來源E.coli fimH基因序列則分別存在7處的堿基變化，第79位(T-A)、第129位(T-C)、第157位(G-A)、第298位(A-T)、第640位(C-A)、第701位(T-C)、第817位(T-C)。其中第129位(T-C)、第157位(G-A)、第29

6、8位(A-T)、第701位(T-C)和第817位(T-C)的改變導(dǎo)致了氨基酸第43位精氨酸(Arg)被半胱氨酸(Cys)取代，第53位甘氨酸(Gly)被精氨酸(Arg)取代，第100位異亮氨酸(Ile)被苯丙氨酸(Phe)取代，第234位和第273位半胱氨酸(Cys)被精氨酸(Arg)取代。
　　5、89株UPEC中Ⅰ型菌毛粘附因子相關(guān)基因fimH陽性率為91％(81/89)，反復(fù)發(fā)作性尿路感染組91.4％(64/70)與急性單純

7、性膀胱炎組89.4％(17/19)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;afaC基因陽性率為71.9％(64/89)，兩組之間(57/70 vs7/19)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ag43相關(guān)基因flu檢出率為67.4％，且反復(fù)發(fā)作尿路感染組flu陽性率明顯高于急性單純性膀胱炎組，P=0.013;P菌毛與S菌毛在本院收集菌株中檢出率均低，分別為23.5％、6.7％，組間無差異。
　　結(jié)論:
　　1、抗生素藥敏譜分型與PFGE分型證明，部分引起泌尿系