細(xì)胞深低溫冷凍損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：近年來，深低溫保存技術(shù)的應(yīng)用越來越廣泛。深低溫可以降低細(xì)胞的呼吸代謝作用，延緩其功能的喪失，臨床上將生物組織或器官采用特殊方法冷卻至深低溫，并長(zhǎng)期保存；待需要時(shí)，再將其按特殊方法復(fù)溫，以便獲得活的生物體。 2002至2006年，我們先后將2例患者的斷指在冷凍保護(hù)劑二甲亞砜(DMSO)的作用下，通過程序降溫在-196℃液氮中保存后再植成功。但術(shù)后長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn)，患指均有不同程度萎縮。據(jù)冷凍損傷的兩因素假說指出，造成細(xì)胞損傷

2、有兩個(gè)獨(dú)立因素：胞內(nèi)冰損傷和溶質(zhì)損傷。一是胞內(nèi)冰的形成，由過快冷卻所產(chǎn)生的；冷卻速率越快，此損傷越大。另一是“溶液損傷”，由過慢冷卻所產(chǎn)生，使細(xì)胞在高濃度溶液中暴露時(shí)間過長(zhǎng)而遭損傷，冷卻越慢，此損傷越大。但是，目前對(duì)低溫?fù)p傷兩因素引起細(xì)胞的死亡方式?jīng)]有進(jìn)行闡明。 為闡明低溫?fù)p傷兩因素引起細(xì)胞的死亡方式，我們選取人肝癌細(xì)胞株BEL-7402經(jīng)熒光染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡、壞死、和細(xì)胞碎片的變化。研究深低溫凍存導(dǎo)致細(xì)胞死亡的方式

3、，并觀察對(duì)細(xì)胞周期的影響。 目的:研究深低溫冷凍損傷導(dǎo)致細(xì)胞死亡的機(jī)制。 方法:在不同的電解質(zhì)與冷凍保護(hù)劑濃度下：1倍離子濃度下50％甘油、0％、10％、50％DMSO及20倍離子濃度下50％DMSO，對(duì)人肝癌株細(xì)胞株(BEL-7402)程序降溫至深低溫后復(fù)蘇。采用Annexin-V/PI熒光標(biāo)記雙染色、DNA-Prep stain熒光標(biāo)記染色流式細(xì)胞儀分析凍存前后凋亡、壞死、存活、細(xì)胞碎片及BEL-7402細(xì)胞周期變化