高粱SbbHLH1互作蛋白、DNA結(jié)合序列的識別及毛白楊轉(zhuǎn)基因的初步研究.pdf

1、高粱是重要的能源作物之一，其bmr突變體表現(xiàn)出低木質(zhì)素含量。閆麗(2011)等利用以高粱野生型BTx623作為tester、以13種不同的bmr突變體作為driver構(gòu)建的抑制差減雜交(SSH)文庫，通過芯片雜交識別出大量轉(zhuǎn)錄差異的基因。SbbHLH1和SbLIM1是其中兩個(gè)差異較明顯的轉(zhuǎn)錄因子基因。前期的研究發(fā)現(xiàn)，SbbHLH1和SbLIM1影響擬南芥的木質(zhì)素生物合成。本文對SbbHLH1調(diào)控木質(zhì)素合成代謝機(jī)制及毛白楊的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行初

2、步的研究，探討這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子對其木質(zhì)素合成的影響。
　　采用酵母雙雜技術(shù)可以研究與SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子的互作蛋白，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子可以與高粱中的SB02G040140蛋白（也是一個(gè)bHLH類的蛋白）互作。表明了SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子會與其他的bHLH結(jié)構(gòu)域蛋白結(jié)合，再參與到木質(zhì)素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。采用SELEX技術(shù)分離得到了與SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的DNA基序E-box（CANNTG），為了驗(yàn)證SbbHLH1轉(zhuǎn)錄

3、因子能夠結(jié)合擬南芥木質(zhì)素生物合成途徑相關(guān)基因啟動子序列中的E-box基序，克隆這些序列，通過DNA和蛋白的結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子可以與AtPAL基因的啟動子結(jié)合，這就進(jìn)一步證明了SbbHLH1轉(zhuǎn)錄因子在擬南芥中可以通過結(jié)合PAL基因調(diào)控木質(zhì)素的生物合成。
　　用攜帶載體pSTART-SbLIM1的農(nóng)桿菌侵染毛白楊芽尖的外植體，通過組織培養(yǎng)、卡那霉素篩選、PCR鑒定獲得12株陽性植株。同時(shí)對三年生SbbHLH1轉(zhuǎn)基因毛白