多聚腺苷酸結(jié)合蛋白互作蛋白1在肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：356529213012南昌大學(xué)博士研究生學(xué)位論文多聚腺苷酸結(jié)合蛋白互作蛋白1在肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制研究MechanismsofPAIP1inhepatocarcinogenesis章諾貝培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：謝勇教授主任醫(yī)師指導(dǎo)教師姓名、職稱：張吉翔教授主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類：臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┱撐拇疝q日期：2017年6月答辯委員會主席：評閱人：20

2、17年5摘要摘要目的：目的：檢測肝癌組織及肝癌細(xì)胞株中PAIP1的表達(dá)水平，研究其在肝癌組織中的表達(dá)水平與肝癌患者的臨床病理特征參數(shù)之間的關(guān)系。觀察肝癌細(xì)胞株SMMC7721中PAIP1基因的表達(dá)下調(diào)對肝癌細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的影響。初步探討PAIP1在肝細(xì)胞癌發(fā)生過程中的作用機(jī)制。方法方法：第一部分PAIP1在肝癌細(xì)胞及肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義采用免疫組織化學(xué)方法檢測肝癌組織芯片PAIP1蛋白表達(dá)水平，比較肝癌組織和癌旁組織PAIP

3、1的表達(dá)水平差異，分析肝癌組織中PAIP1的表達(dá)水平與肝癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；運用實時熒光定量PCR(RTPCR)技術(shù)觀察肝癌細(xì)胞株中的PAIP1mRNA的表達(dá)水平。第二部分PAIP1的表達(dá)下調(diào)對肝癌細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的影響采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)肝癌細(xì)胞株SMMC7721中PAIP1的表達(dá)水平，研究PAIP1表達(dá)下調(diào)前后SMMC7721細(xì)胞的生物學(xué)行為變化。Cellomics細(xì)胞計數(shù)檢測SMMC7721細(xì)胞的增殖能力；流式細(xì)胞

4、儀分析SMMC7721細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡情況；克隆形成實驗觀察SMMC7721細(xì)胞體外克隆形成能力；裸鼠成瘤模型探明SMMC7721細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長情況。第三部分PAIP1基因表達(dá)沉默后差異表達(dá)基因的篩選及驗證采用全基因組表達(dá)譜芯片篩選PAIP1表達(dá)敲減后的下游應(yīng)答基因，利用生物信息學(xué)方法，對應(yīng)答基因進(jìn)行GO，Pathway分析，挑選出與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的關(guān)鍵基因進(jìn)行Westernblotting驗證。結(jié)果：結(jié)果：第一部分PA

5、IP1在肝癌細(xì)胞及肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義在肝癌組織芯片中，PAIP1在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織；PAIP1的表達(dá)水平與肝癌患者的性別、年齡、腫瘤大小及TNM分期等無明顯相關(guān)性，而與肝細(xì)胞癌的病理分級呈正相關(guān)，并與病人生存率呈負(fù)相關(guān)。此外，PAIP1在肝癌細(xì)胞株中也呈高表達(dá)狀態(tài)。第二部分PAIP1的表達(dá)下調(diào)對肝癌細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的影響下調(diào)PAIP1的表達(dá)后，肝癌細(xì)胞增殖能力減弱；細(xì)胞凋亡增多；處于S期、G1期的細(xì)胞無顯