IPC與RPC的不同時相及聯(lián)合應用對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)典缺血預處理(IPC)的第一保護窗和遠端缺血預處理(RPC)的第二保護窗對大鼠肝臟的缺血再灌注(I/R)損傷的保護作用與強度以及聯(lián)合應用是否存在協(xié)同保護作用，并探討其可能的發(fā)生機制。 方法：建立大鼠70％肝臟熱缺血再灌注損傷模型。將40只健康雄性SD大鼠隨機分成5組：①假手術組(S組，n=8)：僅行麻醉殲腹分離肝蒂，不做其它進一步處理；②缺血再灌注組(I/R組，n=8)：阻斷肝左、中葉入肝血流1h，再灌注3h；③經(jīng)典

2、缺血預處理組(IPC組，n=8)：阻斷肝左、中葉入肝血流5min后，再灌注5min，然后處理同I/R組；④遠端缺血預處理組(RPC組，n=8)：用止血帶捆綁大鼠雙后肢，使雙后肢顏色變紫，雙側股動脈不能觸及，阻斷血流5min后，松開恢復血流5min，反復三次，24h后處理同I/R組；⑤遠端缺血預處理+經(jīng)典缺血預處理組(RPC+IPC組，n=8)：制備遠端缺血顱處理模型，方法同RPC組，24h后同IPC組。 各組大鼠于再灌注3h后開

3、腹，取下腔靜脈血2ml，并切取肝左、中葉留作實驗指標檢測：①采用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉氨酶(ALT)與血清谷草轉氨酶(AST)活性：②應用烤箱測定肝臟的濕干比(W/D)；③經(jīng)HE切片行肝組織中性粒細胞(PMN)計數(shù)；④采用免疫組織化學方法檢測肝組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達；⑤用western blot免疫印跡法測定肝組織中熱休克蛋白70(HSP70)的表達；⑥肝臟分別經(jīng)HE切片染色與醋酸鈾檸檬酸染色后，行光鏡和電鏡檢查

4、，觀察肝組織顯微與超微結構。 結果：I/R組大鼠肝臟經(jīng)缺血1h再灌注3h后血清ALT與AST的活性、肝組織W/D比、PMN計數(shù)及TNF-α陽性表達比均明顯高于S組，而肝組織中HSP70在免疫印跡中的表達量稍高于S組，但尚無明顯統(tǒng)計學差異，肝臟在光鏡與電鏡下的顯微與超微結構損傷明顯：IPC組、RPC組及RPC+IPC組的各項指標均明顯好于I/R組，但差于S組；IPC組、RPC組及RPC+IPC組三組間比較：IPC組血清ALT與AS

5、T的活性、肝組織W/D比、PMN計數(shù)及TNF-α陽性表達比在數(shù)值上均低于RPC組，但無明顯統(tǒng)計學差異；RPC組肝組織中HSP70的表達量在數(shù)值上高于IPC組，但亦無明顯統(tǒng)計學差異；IPC+RPC組的各項肝損傷指標及肝組織中HSP70的表達量雖然在數(shù)值上顯示均好于IPC組及RPC組，但無明顯統(tǒng)計學差異。 結論： 1、IPC的第一保護窗與RPC的第二保護窗對正常大鼠肝臟I/R損傷均具有明顯的保護作用，兩者在保護強度上無明顯差