核桃內生菌發(fā)酵產物生物活性及花序的化學成分研究.pdf

1、核桃(Juglans regia)系胡桃科核桃屬(Juglans)植物，別稱胡桃，羌桃，屬于落葉喬木、深根性、喜溫樹種。分布于我國陜西、甘肅、云南、四川、河北等地區(qū)。本實驗對核桃花序乙醇提取物生物活性及化學成分，核桃根、莖、葉的內生菌及其代謝產物的活性進行了研究，研究結果如下：
　　第一，采用濾紙片法研究核桃花序乙醇提取物抑菌活性，結果表明，核桃花序乙醇提取物中的抑菌活性成分主要分布在乙酸乙酯部位。采用DPPH自由基清除活性測定法

2、、總還原力測定法和羥基自由基清除活性測定法研究了核桃花序乙醇提取物抗氧化活性，DPPH自由基和羥基自由基清除活性測定結果顯示，抗氧化活性成分主要集中在中等極性的乙酸乙酯部位；而總還原力測定結果顯示，抗氧化活性成分主要集中在極性較大的正丁醇部位。采用多種現(xiàn)代色譜分離手段和現(xiàn)代波譜技術對核桃花序的化學成分進行研究，共分離得到9個化合物，鑒定了其中的7個，它們分別是1-(1-甲基-丁-3-烯基)-2-(1,1-二甲基-丙氧基)-4-甲苯(1)

3、、β-谷甾醇(2)、4,8-二羥基-1-四氫萘醌(3)、(Z)-7-乙酰-甲基-11-甲基-3-亞甲基-十二碳-1,6,10-三烯(4)、2S,3S,4 S-三羥基戊酸(5)、3-甲氧基-2-[3-羥基苯基]-4H-呋喃[2,3-H]-1-苯并吡喃-4-酮(6)、槲皮素-3-O-(2''-β-D-吡喃葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷(7)。
　　第二，采用組織分離法對核桃根、莖、葉的內生真菌進行了分離，共分離得到19株內生真菌，其中根

4、部7株，莖部5株，葉部7株。對其中產孢子的8株內生菌進行形態(tài)學鑒定。結果表明，它們分屬于鏈格孢屬 Fusarium(2株)、串珠霉屬 Monilia(1株)、側孢霉屬 Sporotrichum(1株)、曲霉屬(Aspergillus)(1株)、青霉屬Penicillium(2株)和微囊菌屬Microascus（1株）共6個屬，叢梗孢目(Miniliales)和微囊菌目(Microascales)2個目，涉及絲孢綱(Hyphomycete

5、s)、真子囊菌亞綱(Euascomycetes)，為后續(xù)內生菌及發(fā)酵產物活性研究提供了豐富材料。
　　第三，分別采用濾紙片法，DPPH自由基清除法、羥自由基清除法和總還原力法對核桃內生真菌發(fā)酵產物做體外抑菌活性、抗氧化活性研究。抑菌研究結果表明，乙酸乙酯部位活性較好的菌株有6株，占總菌株的31.57％，根部活性菌株最多，其中R-401(根)對5種指示菌都有很強的抑制活性，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、肺炎鏈球菌最小抑菌濃度均達到了0

6、.313 mg/mL，而S-101(莖)有較強的抑菌作用，對地衣芽孢桿菌最小抑菌濃度為0.313 mg/mL，而正丁醇部位抑菌活性較弱，其中活性較好的為L-102，對綠膿桿菌、肺炎鏈球菌的抑菌活性最強，最小抑菌濃度都達到0.625 mg/mL，而S-101對地衣芽孢桿菌的最小抑菌濃度也為0.625 mg/mL。乙酸乙酯部位抗氧化活性結果表明，DPPH自由基清除活性測定實驗中，19個樣品均有不同程度的清除能力，其中有9個樣品有較強的清除率

7、，占總數(shù)的47.36%?？傔€原力測定結果表明，19個樣品均表現(xiàn)出還原力，其中R-401的維生素C相當含量為157.66μg/mg，其它樣品的維生素C相當含量都小于100μg/mg。羥基自由基活性測定結果表明，核桃內生菌對羥基自由基的清除能力較弱，只有R302、S-101的清除率大于50%，分別為71.86%、53.09%。正丁醇部位抗氧化活性較弱。
　　以上研究結果表明，核桃花序化學成分豐富多樣，核桃內生真菌種群繁多，發(fā)酵產物具有