中藥消除劑對大腸桿菌耐藥性消除作用的研究.pdf

1、致病性大腸桿菌是獸醫(yī)臨床上最常見的病原菌之一，給畜牧業(yè)的發(fā)展帶來嚴(yán)重的危害。因其血清型的復(fù)雜性，不同地區(qū)、不同時間引起的疾病難以有理想的普適疫苗用于預(yù)防。同時由于抗生素長期、大量、不合理使用，細(xì)菌耐藥性問題日益嚴(yán)重，產(chǎn)生大量多重耐藥株。本論文主要對重慶地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場致病性大腸桿菌的耐藥表型水平，有效消除耐藥性的中藥及其消除機(jī)理進(jìn)行了研究。
　　 本試驗主要進(jìn)行了以下五方面的工作：
　　 1.臨床病料采集、分離鑒定

2、>　　 采用無菌直腸拭子法在重慶璧山、合川等四個養(yǎng)豬場采集臨床病料，進(jìn)行病原菌的分離培養(yǎng)，經(jīng)過培養(yǎng)、形態(tài)、生化試驗及小鼠致病性試驗，鑒定出131株致病性豬源大腸桿菌。
　　 2.致病菌株藥敏試驗及耐藥譜的檢測
　　 采用WHO推薦的紙片擴(kuò)散法，按NCCLS(2007)判定標(biāo)準(zhǔn)，檢測了被分離鑒定的131株致病性大腸桿菌對18種常用抗菌藥物的耐藥性，分析比較其多重耐藥情況以及對不同抗菌藥物的耐藥率。試驗結(jié)果表明：全部受檢菌

3、株均表現(xiàn)出不同程度的耐藥性。多數(shù)為8耐以上的菌株，一共有120株(91.6％)。其中，耐藥率最高的為16耐，有7株(5.3％)，最低的為6耐，有4株(3.1％)。對青霉素G的耐藥率為100％，對鏈霉素的耐藥率為96.2％，最為敏感的藥物是頭孢曲松鈉(81.7％)、頭孢哌酮鈉(71.8％)。氨基糖苷類藥物中，耐藥率依次為鏈霉素(96.2％)、卡那霉素(81.7％)、慶大霉素(71.8％)、妥布霉素(59.5％)、壯觀霉素(47.3％)、阿

4、米卡星(32.8％)、新霉素(27.5％)。
　　 3.研究中藥三黃制劑及蒲黃水煎液對人工構(gòu)建耐藥菌株MIC的影響
　　 構(gòu)建耐藥質(zhì)粒與耐藥表型明確的耐藥菌株，分別編號KA、KD.通過篩選出的中藥三黃制劑及蒲黃水煎液，利用平板稀釋法和葡萄糖酚紅肉湯稀釋法，測定KA、KD的MIC。綜合比較兩種方法，MIC最終分別為：復(fù)方蒲黃煎液KA100mg/ml，KD100mg/ml，復(fù)方三黃制劑MIC為KA100mg/ml，KD50m

5、g/ml。
　　 4.篩選中藥最適耐藥消除濃度，并驗證耐藥菌株的遺傳穩(wěn)定性
　　 通過不同中藥濃度對細(xì)菌生長的影響，可見中藥耐藥消除率與中藥作用濃度呈正相關(guān)，1/2MIC為中藥最佳作用濃度。通過中藥1/2MIC濃度下培養(yǎng)與普通肉湯培養(yǎng)對比中藥耐藥質(zhì)粒消除率，發(fā)現(xiàn)中藥有明顯的消除作用，五天后耐藥菌株的MIC可降至1/8；經(jīng)t檢驗，與空白對照相比，有顯著性差異(P＜0.05)。去除中藥作用后，檢驗?zāi)退幈硇瓦z傳穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)耐藥