雞致病性大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)及基因型研究.pdf

1、本論文主要研究我國(guó)部分地區(qū)雞致病性大腸桿菌的生物學(xué)特性和耐藥性變遷趨勢(shì)，并從分子水平對(duì)其流行特點(diǎn)和耐藥機(jī)制進(jìn)行探討，從而為雞大腸桿菌病的有效防治和新獸藥開發(fā)提供參考。本研究主要分3部分: 1、雞致病性大腸桿菌的分離、鑒定及。血清型分析自我國(guó)東北、河北、山東、華東四地區(qū)養(yǎng)雞場(chǎng)有典型大腸桿菌病癥狀的病、死雞中分離出33株細(xì)菌。經(jīng)生化實(shí)驗(yàn)鑒定出2l株分離菌為大腸桿菌，通過對(duì)雛雞及小鼠的致病性試驗(yàn)，證明該21株大腸桿菌均為高致病性大腸

2、桿菌。采用玻板凝集和試管凝集相結(jié)合的方法，對(duì)21株雞致病性大腸桿菌進(jìn)行O血清型鑒定，共8株大腸桿菌確定為3種血清型，分別為O88(4株)，O26(3株)，O78(1株)，共占分離菌株的38.1％，13株未定型(其中2株發(fā)生自凝)；O88血清型在東北、山東、華東地區(qū)均有分布，O26血清型在河北、山東、華東地區(qū)均有分布，所以O(shè)88和O26為優(yōu)勢(shì)血清型。雞致病性大腸桿菌血清型眾多，分布復(fù)雜，地區(qū)差異較大，O血清型鑒定為更好的預(yù)防大腸桿菌病提供

3、科學(xué)根據(jù)。 2、雞致病性大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)按世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的Kirby-Bauer菌液涂布法對(duì)21株雞致病性大腸桿菌進(jìn)行氟苯尼考、鏈霉素、四環(huán)素等12種抗生素的藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果表明:分離菌對(duì)阿莫西林耐藥性最高，為100％，余下的依次為諾氟沙星95.24％、四環(huán)素95.24％、多西環(huán)素95.24％、環(huán)丙沙星90.48％、氧氟沙星85.71％、鏈霉素66.67％、氟苯尼考57.14％、紅霉素47.62％、慶大霉素3

4、3.33％、新霉素19.05％和阿米卡星19.05％。21株雞致病性大腸桿菌均有不同程度的耐藥，而且均表現(xiàn)多重耐藥，最少的4耐，最多的12耐，平均達(dá)8耐。不同地區(qū)分離的雞致病性大腸桿菌敏感藥物不同:東北地區(qū)分離株對(duì)氟苯尼考、新霉素和阿米卡星敏感；河北地區(qū)分離菌株對(duì)慶大霉素和新霉素敏感；山東地區(qū)分離株對(duì)新霉素和阿米卡星敏感；華東地區(qū)分離株對(duì)12種抗生素均不敏感。藥物敏感性試驗(yàn)為臨床上科學(xué)用藥提供了依據(jù)。 3、應(yīng)用ERIC-PCR

5、方法對(duì)雞致病性大腸桿菌進(jìn)行基因分型對(duì)分離的21株雞致病性大腸桿菌提取基因組DNA，采用ERIC-PCR技術(shù)，對(duì)其基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，其PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，根據(jù)各菌株間的Nei相似系數(shù)繪制基因進(jìn)化樹，21株分離菌株被分成A，B，C，D，E，F(xiàn)，G，H，I，9個(gè)ERIC基因型，主要基因型為D型，11株:3株東北株、3株河北株、4株東北珠、1株華東株；其次為E型，東北、山東、華東各一株；其它基因型各一株。比較不同ERIC基因型