重慶市豬源大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥性的研究.pdf

1、隨著β-內(nèi)酰胺類抗生素在醫(yī)學(xué)及獸醫(yī)臨床上的廣泛應(yīng)用,大腸桿菌的耐藥性問題,尤其是產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和頭孢菌素β-內(nèi)酰胺酶(AmpCs)大腸桿菌的耐藥性問題越來越嚴(yán)重,給臨床治療帶來了極大的困難,其對(duì)醫(yī)學(xué)臨床治療的影響引起了廣泛關(guān)注。產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶和頭孢菌素β-內(nèi)酰胺酶是大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生耐藥的主要原因,加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物源ESBLs和AmpCs產(chǎn)生菌的監(jiān)測有利于更有效的控制耐藥性的產(chǎn)生和傳播。為此,本論文初步

2、研究了重慶地區(qū)豬源大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥情況和耐藥機(jī)制,旨在為本地區(qū)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、耐藥性的消除以及合理使用抗菌藥物提供理論依據(jù)。
　　 1.豬源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析
　　 通過調(diào)查重慶地區(qū)規(guī)模化豬場大腸桿菌的耐藥情況,指導(dǎo)臨床合理用藥,為耐藥性的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。2007年5月～2008年5月從重慶市榮昌、大足、銅梁、合川、北碚、長壽、涪陵、武隆、黔江、綦江、江津等地規(guī)?；i場,采集了157份仔豬

3、黃白痢病料,經(jīng)分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察、生化鑒定及致病性試驗(yàn),共得到124株豬源致病性大腸桿菌。采用CLSI推薦的K-B紙片擴(kuò)散法對(duì)124株大腸桿菌進(jìn)行34種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)。
　　 結(jié)果:124株豬源致病性大腸桿菌對(duì)34種抗菌藥物存在廣泛的耐藥性,其中,敏感性較高的藥物依次為:多粘菌素B、氨芐西林/舒巴坦、氨曲南、頭孢西丁、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢呋肟、頭孢哌酮；耐藥性較高的藥物依次為氨芐西林、四環(huán)素、利福平、

4、復(fù)方新諾明、氯霉素、卡那霉素,所有菌株對(duì)頭孢菌素類藥物的耐藥率在4.03％～19.35％,僅對(duì)頭孢噻吩的耐藥率達(dá)39.52％。124株大腸桿菌共有121種耐藥譜,且以多重耐藥為主,最少的3耐,最多的可達(dá)27耐,其中,3～7耐9株(7.3％),8～11耐32株(25.8％),12～15耐48株(38.7％),16～19耐19株(15.3％),20～27耐16株(12.9％),12耐菌株占受試菌株的比例最大,多數(shù)菌株為10耐以上。對(duì)不同地區(qū)

5、的耐藥性進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)重慶地區(qū)各區(qū)縣豬場的大腸桿菌耐藥性差異不大,各豬場分離的大腸桿菌均對(duì)利福平、四環(huán)素、氨芐西林和復(fù)方新諾明高度耐藥,對(duì)多粘菌素B、氨芐西林/舒巴坦、氨曲南、頭孢他啶和頭孢西丁高度敏感。
　　 結(jié)論:重慶地區(qū)豬源大腸桿菌對(duì)多種抗菌藥物的耐藥率較高,應(yīng)加強(qiáng)豬場細(xì)菌耐藥性的監(jiān)控并建立合理的用藥原則。
　　 2.豬源大腸桿菌ESBLs及AmpCs基因型的分析
　　 為了解重慶地區(qū)豬源大腸桿菌產(chǎn)ESBL

6、s和AmpCs的基因型分布。利用初篩及表型確認(rèn)方法,從臨床分離的124株豬源致病性大腸桿菌中分別篩選出產(chǎn)ESBLs及AmpCs的大腸桿菌,并應(yīng)用PCR擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物測序方法對(duì)產(chǎn)酶菌株進(jìn)行ESBLs及AmpCs基因型分析。
　　 結(jié)果:從124株豬源致病性大腸桿菌中篩選出產(chǎn)ESBLs菌9株,產(chǎn)AmpCs菌5株,總檢出率為11.3％(14/124)。重慶地區(qū)豬源大腸桿菌攜帶TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的陽

7、性率分別為:4.0％、6.5％、1.6％和1.6％。其中,ESBLs基因有TEM-1型、CTX-M-14型、CTX-M-15型和CTX-M-27型,AmpCs基因有CMY-2型和DHA-1型。有1株大腸桿菌同時(shí)攜帶CTX-M-15型和TEM-1型2種基因,有3株大腸桿菌同時(shí)攜帶CTX-M-14型和TEM-1型基因,而DHA-1型基因?yàn)閲鴥?nèi)獸醫(yī)臨床首次檢出,獲得GenBank登錄號(hào)為FJ386455。
　　 結(jié)論:重慶地區(qū)豬源大腸

8、桿菌存在一定比例的β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥菌株。該地區(qū)以。TEM型和CTX-M型β-內(nèi)酰胺酶為主,且產(chǎn)ESBLs與AmpCs大腸桿菌為多重耐藥菌株,需引起獸醫(yī)臨床的高度重視。
　　 3.大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥性水平傳播機(jī)制的研究
　　 為探討重慶地區(qū)豬源大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性的水平傳播機(jī)制,對(duì)9株產(chǎn)ESBLs和4株產(chǎn)AmpCs的β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥大腸桿菌進(jìn)行耐藥質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化試驗(yàn),按照K-B紙片擴(kuò)散法測定

9、原菌株及轉(zhuǎn)化子對(duì)34種抗菌藥物的敏感性,并采用質(zhì)粒提取試劑盒提取原菌株及轉(zhuǎn)化子的質(zhì)粒進(jìn)行電泳檢測分析,應(yīng)用PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)化子中ESBLs及AmpCs基因。
　　 結(jié)果:從13株耐藥菌中成功獲得7株轉(zhuǎn)化子,轉(zhuǎn)化成功率為53.8％(7/13)。通過轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化子獲得了原菌株部分或全部質(zhì)粒和耐藥基因,使轉(zhuǎn)化子表現(xiàn)出與原菌株相似的耐藥性。
　　 結(jié)論:大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性可由質(zhì)粒介導(dǎo),其耐藥性質(zhì)?？梢酝ㄟ^轉(zhuǎn)化在細(xì)菌間水