高糖作用的系膜細胞Smad蛋白表達的泛素化調(diào)節(jié).pdf

1、目的：糖尿病腎病(DN)是糖尿病的重要微血管并發(fā)癥之一，多數(shù)研究認為20％～30％的糖尿病患者發(fā)生DN。DN早期的病變特點為腎小球基底的增厚以及細胞外基質(zhì)(ECM)的增生，從而導致腎小球的高濾過和微量白蛋白尿。系膜細胞在這些病理過程中起著重要作用。盡管嚴格的控制血糖、血壓以及血脂可以減少DN發(fā)生的危險性，但仍然不能完全阻止糖尿病患者從早期DN進展至終末期腎病(ESRD)。DN的發(fā)病機制仍未完全清楚，目前研究證實，高血糖、血流動力學、細胞

2、因子等多種因素參加與了DN的發(fā)生。近年來，轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)/smad信號通路在DN發(fā)病中的作用日益受到關注，研究證實了TGF-β/smad信號轉(zhuǎn)導通路參與了ECM沉積，DN腎臟纖維化形成的過程。而泛素-蛋白酶體途徑(UPP)是一種細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的重要的特異性降解途徑，泛素介導的蛋白酶體降解是調(diào)節(jié)TGF-β/smad信號轉(zhuǎn)導功能的重要機制之一，在UPP中E3泛素連接酶Smurf2可選擇性泛素化降解TGF-β下游信號Smad蛋白

3、。但糖尿病時UPP如何調(diào)節(jié)TGF-β/smad信號通路，參與DN發(fā)病，尚未見文獻報道。為進一步明確Smad蛋白在DN時的變化以及UPP在糖尿病Smad信號中的作用，本研究觀察了高糖刺激后大鼠腎小球系膜細胞(GMC)胞內(nèi)信號蛋白Smad和Smad泛素化調(diào)節(jié)因子-Smurf的表達，并以蛋白酶體特異性抑制劑MG132作為泛素-蛋白酶體途徑阻斷劑，初步探討了泛素化降解及smad信號蛋白在糖尿病腎病發(fā)病機制中的作用，為DN的防治尋求新的理論依據(jù)。

4、 方法：將體外培養(yǎng)的大鼠HBZY-1腎小球系膜細胞株分為7組。分別設： ①正常對照組(葡萄糖濃度5.6mmol/L)； ②20mmol/L高糖組； ③30mmol/L高糖組； ④甘露醇組(24.4mmol/L甘露醇作為滲透壓對照)； ⑤正常組加MG132(1μmol/L)組； ⑥30mmol/L高糖加MG132組； ⑦30mmol/L高糖加二甲基亞砜(1μmol/LDMSO

5、)組。 用細胞免疫熒光染色法及激光共聚焦顯微鏡檢測各組系膜細胞泛素連接酶Smurf2及TGF-β下游信號蛋白Smad2/3、Smad7的表達。 結(jié)果： 1、正常組系膜細胞Smurf2、Smad2/3蛋白表達較弱，Smad7蛋白表達較強。 2、高糖組系膜細胞Smurf2、Smad2/3表達較正常糖組均增強(P<0.05)，Smad7表達減弱(P<0.05)，甘露醇組系膜細胞較正常糖組均無明顯變化(P>0.0