AMPK在高糖誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細(xì)胞Ⅳ型膠原過度表達(dá)中的作用.pdf

1、目的：
　　 腎小球系膜基質(zhì)增生是糖尿病腎病重要的病理表現(xiàn)之一。阻斷和逆轉(zhuǎn)上述病理變化是防治糖尿病腎病的重要策略。研究發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境下的腎小球上皮細(xì)胞AMPK活性明顯降低。AMPK是否參與了糖尿病狀態(tài)下系膜基質(zhì)增生的過程目前尚不清楚。本研究觀察高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)和活性的變化，以及這種變化與腎小球系膜基質(zhì)增生的關(guān)系；并引入AMPK激活劑AICAR，觀察其是否對(duì)高糖環(huán)境誘導(dǎo)的腎小球系膜基質(zhì)增生具有糾正作用。

2、r>　　 方法：
　　 1、高糖環(huán)境的建立：分別采用DMEM低糖與高糖細(xì)胞培養(yǎng)基，糖濃度5.6mmol/L為低糖對(duì)照組、糖濃度為22.0mmol/L為高糖實(shí)驗(yàn)組。
　　 2、實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組（糖濃度5.6mmol/L），高糖組（糖濃度22.0mmol/L），低濃度AICAR組（高糖+0.5mmol/L AICAR），高濃度AICAR組（高糖+1.Ommol/L AICAR）。分組培養(yǎng)24小時(shí)后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　

3、　 3、AMPK表達(dá)及其活性的測(cè)定：采用RT-PCR方法測(cè)定AMPKα1亞單位mRNA水平；采用Western blot方法測(cè)定總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平。
　　 4、Ⅳ型膠原蛋白表達(dá)的測(cè)定：采用Western blot方法測(cè)定Ⅳ型膠原蛋白α5亞單位水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、高糖環(huán)境對(duì)細(xì)胞AMPK表達(dá)及活性的影響：RT-PCR顯示，在高糖環(huán)境下培養(yǎng)系膜細(xì)胞24小時(shí)后，其AMPKα1亞單

4、位的mRNA水平顯著低于對(duì)照組(p<0.01)；利用Western blot方法測(cè)定的總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平也顯著低于對(duì)照組(p<0.01)。
　　 2、高糖環(huán)境對(duì)腎小球系膜細(xì)胞Ⅳ型膠原蛋白α5(COL4α5)表達(dá)水平的影響：高糖培養(yǎng)24小時(shí)后，腎小球系膜細(xì)胞COL4α5表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(p<0.01)。
　　 3、AICAR對(duì)高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)及其活性的影響：與高糖組相比

5、，AICAR組AMPKα1亞單位的mRNA水平顯著升高(p<0.01)，總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白表達(dá)水平也顯著升高(p<0.01)。
　　 4、AICAR對(duì)高糖環(huán)境中腎小球系膜細(xì)胞COL4α5表達(dá)的影響：與高糖組比較，AICAR組COL4α5表達(dá)水平顯著下降(p<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞AMPK的表達(dá)及活性均受到抑制。
　　 2、高糖環(huán)境下腎小球系膜