p70S6K在糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及高糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf

1、目的:
　　 在鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病(DM)大鼠，研究磷酸化核糖體40s小亞基S6蛋白激酶(p-p70S6KThr389)在大鼠腦組織海馬區(qū)的動(dòng)態(tài)變化及其與糖尿病病程，認(rèn)知功能障礙及海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性;在體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)細(xì)胞，分析高糖是否通過激活mTOR/p70S6K信號(hào)通路來介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。
　　 方法:
　　 通過腹腔注射STZ（60mg/kg）制作糖尿病大鼠

2、模型，3d后測尾靜脈血隨機(jī)血糖，血糖＞16.7mmol/L，大鼠視為造模成功。將造模成功的大鼠及正常對照大鼠隨機(jī)分成11周、15周和20周組，DM組每組9只，正常對照組每組7只。于造模成功后第11周、15周和20周，利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測其學(xué)習(xí)和記憶能力。每周次大鼠行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后，心臟采血，斷頭取腦，迅速留取雙側(cè)海馬組織，運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測大鼠11周、15周和20周海馬組織中p-p70S6K(Thr389)、Ba

3、x及Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。用不同濃度的葡萄糖(25mM、50mM、75mM)孵育SH-SY5Y細(xì)胞72小時(shí)，75mM甘露醇作為等滲對照。應(yīng)用Hoechst染色法檢測細(xì)胞凋亡率，蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測凋亡相關(guān)蛋白（Bax及Bcl-2）及哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR，包括p-mTORser2448和t-mTOR)、p-p70S6K(Thr389)蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.STZ誘導(dǎo)的DM大鼠認(rèn)知功能障礙的

4、變化:Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)表明，成模后11周，與同周數(shù)正常大鼠比較，DM大鼠逃避潛伏期及在原平臺(tái)所在象限停留時(shí)間差異無顯著性(P＞0.05);成模后15及20周，與同周數(shù)正常大鼠比較，DM大鼠逃避潛伏期隨病程的延長逐漸增加(P＜0.05)，在原平臺(tái)所在象限停留時(shí)間隨病程的延長逐漸縮短(P＜0.05)。
　　 2.DM大鼠腦組織海馬區(qū)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平的變化:成模后11周，與同周數(shù)正常大鼠比較，DM大鼠腦組織海馬區(qū)凋

5、亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2比值差異無顯著性(P＞0.05);成模后15及20周，與同周數(shù)正常大鼠比較，DM大鼠較海馬組織凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2比值隨病程的延長逐漸增加(P＜0.05)。
　　 3.DM大鼠腦組織海馬區(qū)p-p70S6K(Thr389)蛋白表達(dá)水平的變化:成模后11周，與正常大鼠比較，DM大鼠海馬組織p-p70S6K(Thr389)差異無顯著性(P＞0.05);成模后15及20周，與同周數(shù)正常大鼠比較，DM

6、大鼠較海馬組織凋亡p-p70S6K(Thr389)隨病程的延長逐漸增加(P＜0.05)。
　　 4.在體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞，與等滲對照組比較，高糖組（50mmol/L或75mmol/L，72h）凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2比值及細(xì)胞凋亡率均增加(P＜0.05)，而mTOR(p-mTORser2448和t-mTOR)和p-p70S6K(Thr389)的表達(dá)差異均無顯著性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論: