拉米夫定耐藥患者的臨床特點及耐藥毒株的分子病毒學(xué)研究.pdf

1、隨著以拉米夫定為代表的新一代核苷類似物在中國慢性乙型肝炎患者中的廣泛應(yīng)用,核苷類似物耐藥成為目前臨床關(guān)注的焦點問題.我們采用本室先前建立的RFLP方法篩檢YMDD變異并將其應(yīng)用于臨床監(jiān)測拉米夫定治療過程中耐藥性的產(chǎn)生,取得了較好的效果.由于RFLP的局限性,我們對篩檢YMDD變異陽性的標(biāo)本進(jìn)行了P基因測序,以進(jìn)一步了解拉米夫定耐藥株的P基因A-E區(qū)序列特點.該研究中還有2例患者中分別因為P基因rtD83N和rtM204I變異導(dǎo)致HBsA

2、g的表達(dá)提前出現(xiàn)終止,但患者仍表現(xiàn)為HBsAg陽性,說明在患者中這種提前終止的變異株均與野毒株同時存在.為進(jìn)一步研究變異毒株的生物學(xué)意義,我們通過定向點突變,成功的在模板P3.8Ⅱ的基礎(chǔ)上構(gòu)建了五種P基因變異株,并在此基礎(chǔ)上將包含不同突變點的全基因質(zhì)粒通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞.通過轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),五種不同的P基因變異株均可表達(dá)并分泌HBsAg和HBeAg,證明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)可正常表達(dá)和分泌,但五種變異株與野株