黑素瘤分泌的PAEP對(duì)體外T淋巴細(xì)胞免疫抑制作用的研究.pdf

1、惡性黑素瘤是皮膚黑素細(xì)胞系統(tǒng)所發(fā)生的惡性程度最高的腫瘤之一。盡管近年來(lái)生物科學(xué)在各個(gè)領(lǐng)域迅猛發(fā)展，黑素瘤的臨床治療手段卻沒(méi)有根本的改進(jìn)，死亡病例高達(dá)皮膚癌所致死亡的80％，因此深入分析黑素瘤的發(fā)病機(jī)制，探索有效的治療方案非常重要。以往的研究表明，黑素瘤的發(fā)生發(fā)展與孕激素相關(guān)子宮內(nèi)膜蛋白(progestagen-associatedendometrial protein，PAEP)表達(dá)量密切相關(guān)，但是其作用機(jī)理尚不明確。本研究擬對(duì)PAEP

2、促腫瘤發(fā)展的免疫機(jī)制進(jìn)行分析和探索。
　　PAEP又稱為glycodelin，最早是從人類胎盤(pán)、羊水、懷孕期子宮蛻膜中發(fā)現(xiàn)并分離出的一種糖蛋白。大量的研究表明，它能夠抑制T細(xì)胞的免疫活性，對(duì)妊娠期母體免疫耐受的建立和HLA半相合胚胎植入起重要的調(diào)節(jié)作用。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)PAEP基因在惡性黑素瘤組織和及體外培養(yǎng)的細(xì)胞系中高水平表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲具有促進(jìn)作用。鑒于腫瘤侵襲和胚胎植入的相似性，我們推測(cè)存在這種可能:高表達(dá)的PA

3、EP對(duì)T細(xì)胞具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用，使得腫瘤細(xì)胞逃脫了免疫細(xì)胞的監(jiān)視和殺傷而迅速發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。
　　為了證明這個(gè)假設(shè)，我們從以下三方面進(jìn)行了研究:1.采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)PAEP在黑素瘤細(xì)胞系中mRNA和蛋白的表達(dá);2.利用化學(xué)合成的PAEP siRNA和PAEP shRNA重組慢病毒感染腫瘤細(xì)胞，下調(diào)PAEP的表達(dá)并通過(guò)藥物篩選獲得PAEP表達(dá)抑制的穩(wěn)定細(xì)胞系，為下一步實(shí)驗(yàn)提供蛋白樣品及細(xì)胞模型;3.分離人外

4、周血單個(gè)核細(xì)胞及純化的CD8+T細(xì)胞，分別將PAEP蛋白或PAEP表達(dá)抑制的腫瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合，與對(duì)照組相比觀察淋巴細(xì)胞的增殖、凋亡和腫瘤殺傷功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1.分別從mRNA和蛋白水平證實(shí)了PAEP基因在黑素瘤細(xì)胞系的表達(dá);2.PAEP siRNA顯著降低了PAEP mRNA的表達(dá);通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染獲得了PAEP表達(dá)抑制的穩(wěn)定細(xì)胞系及非靶向shRNA對(duì)照細(xì)胞;3.PAEP條件培養(yǎng)上清加入體外活化的淋巴細(xì)胞后，細(xì)胞增殖明顯變